[发明专利]一种测定万古霉素的胶乳增强免疫比浊试剂盒

说明书

本发明提出一种测定万古霉素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和万古霉素校准品；试剂R1包括万古霉素检测抗原、缓冲剂、NaCl、BSA、MgCl₂、10％NaN₃溶液、EDTA‑2K和葡聚糖；试剂R2包括万古霉素抗体、万古霉素致敏胶乳微球、缓冲剂、NaCl、Blockmaster DB1130、10％NaN₃溶液、蔗糖、海藻糖和葡聚糖；从而提出一种具有操作简单、快速、灵敏度高的特点，并具有良好的准确度和稳定性，可与金标准HPLC检测值高度一致的万古霉素检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及万古霉素检测技术领域，尤其涉及一种测定万古霉素的胶乳增强免疫比浊试剂盒。

背景技术

万古霉素，是一种多肽类抗生素，通常以盐酸盐形式存在，在溶液中能被多种重金属盐类沉淀。作为一种窄谱抗生素，仅对革兰阳性菌有效，如溶血性链球菌、肺炎球菌及肠球菌等均属敏感，对耐药金葡菌尤为敏感。其作用机制是抑制细菌细胞壁的合成，它主要和细菌细胞壁结合，而使某些氨基酸不能进入细胞壁的糖肽中，一般被作为抗生素的“最后一道防线”，万古霉素是治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌所致的重症感染包括败血症、肺部感染、皮肤软组织感染的疗效确切又比较安全的抗生素。对于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌院内肺部感染，万古霉素为首选药物。

万古霉素的治疗窗非常小(有效浓度与中毒浓度接近)，不良反应大，主要包括肾损害和耳毒性，因此进行药物浓度监测十分重要。尤其是肾功能减退的患者，或同时接受其它肾毒性耳毒性抗生素治疗的患者，根据血药浓度调整治疗更为关键。

目前检测万古霉素血药浓度的方法主要有高效液相-质谱联用(HPLC-MS)、化学发光微粒子免疫测定(CMIA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)等。其中HPLC-MS法测定血药浓度准确、灵敏，但其操作繁琐，检测时间长，检测成本高，需要昂贵设备，主要用于科研领域或作为一种参考方法。CMIA是目前常用的检测方法，其检测自动化程度高，检测结果准确，但试剂价格昂贵，需要使用专门配套的仪器。酶联免疫吸附法则存在检测时间长，操作复杂，重复性差等缺点。

发明内容

本发明的目的在于提出一种操作简单、快速、灵敏度高、可应用于自动生化分析仪的万古霉素检测方法及用于检测的试剂盒。

为达到上述目的，本发明提出一种测定万古霉素的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和万古霉素校准品；

所述试剂R1包括万古霉素检测抗原、缓冲剂、NaCl、BSA、MgCl₂、10％NaN₃溶液、EDTA-2K和葡聚糖；

所述试剂R2包括万古霉素抗体、万古霉素致敏胶乳微球、缓冲剂、NaCl、Blockmaster DB1130、10％NaN₃溶液、蔗糖、海藻糖和葡聚糖。

进一步的，在所述试剂R1和R2中，所述缓冲剂为下述任一试剂与其共轭酸或共轭碱组成的缓冲对：2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、3-(N-吗啡代)丙烷磺酸(MOPSO)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)；

所述试剂R1和R2的pH为5.0-9.0；所述缓冲剂的浓度优选为15-100mM。

进一步的，在试剂R1中，各组分的浓度为：400-900ug/L万古霉素检测抗原、5.33g/LMES一水合物、9g/LNaCl、5g/LBSA、0.5g/LMgCl₂、5mL/L 10％NaN₃溶液、5g/L EDTA-2K以及18g/L葡聚糖(450000-600000)。