[发明专利]一种重组双功能融合蛋白及应用

说明书

本发明提供了一种重组双功能融合蛋白及应用，涉及融合蛋白技术领域。本发明所述融合蛋白由抗人MSLN抗体与结合人CD47蛋白的单域结构连接而成。该蛋白能够同时与MSLN以及CD47结合，从而通过抗体依赖、细胞介导的细胞毒及补体依赖的细胞毒活性而发挥对MSLN阳性肿瘤细胞的治疗作用，并且阻断CD47与巨噬细胞表面上的SIRP结合，激活巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，具有显著的抗肿瘤活性，其肿瘤抑制效果优于单一抗MSLN单抗治疗，可以用来治疗抗MSLN单抗无效或耐受的肿瘤。

技术领域

本发明属于融合蛋白技术领域，具体涉及一种重组双功能融合蛋白及应用。

背景技术

间皮素(mesotnelin，MSLN)是一种40kDa的细胞表面糖蛋白，不是癌症特异性抗原，是一种分化抗原，在正常组织中以相对较低的水平表达。与正常组织相比，间皮素在多种类型的实体瘤中高表达，例如胰腺癌、卵巢癌、恶性间皮瘤、肺腺癌以及子宫内膜癌、胆道胃癌和前列腺癌。间皮素在胸膜、心包和腹膜内衬的正常间皮细胞上表达。间皮素在正常组织上的有限分布使其成为肿瘤特异性治疗的有望靶标。间皮素基因编码一个71kDa的前体蛋白，由2138bp长的cDNA编码，包含628个氨基酸，该蛋白被加工成一个40kDa的膜结合蛋白(称为间皮素)和一个31kDa的脱落片段，称为巨核细胞增强因子(megakaryocyte-potentiating factor，MPF)，该片段从细胞中释放出来。间皮素蛋白是单克隆抗体K1识别的抗原，通常是与膜结合的糖脂酰肌醇(GPI)连接的蛋白质；而MPF是从人胰腺癌细胞系的培养基中分离得到的。间皮素在约30％的癌症中过表达，肿瘤间皮素的表达通常与肿瘤侵袭性增加和临床不良预后有关。

信号调节蛋白(SIRP)是一种穿模糖蛋白，属于跨膜蛋白家族。信号调节蛋白具有三个成员：SIRPα(CD172a)、SIRPβ(CD172b)、SIRPγ(CD172g)。这三个成员具有相似的胞外区域，但胞内结构域不同。胞外结构域包含三个免疫球蛋白(Ig)样区域，其中第一个Ig样区域为N端V样结构域(D1)，第二、三个区域是两个C1样结构域。SIRPα(CD172a)的胞内结构域包含两个抑制性信号传导区域默契可以抑制信号转导以及相应的细胞功能。SIRP主要表达在巨噬细胞(M)、树突状细胞(DC)和神经元中。

CD47也是一种穿模糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族，且在包括红细胞在内的所有细胞类型的表面表达，在细胞与细胞之间的通讯中具有多种功能。CD47与多种配体相互作用，例如整联蛋白、SIRPα、SIRPγ和血小板反应蛋白。CD47与SIRPα相互作用，CD47下调表达SIRPα的吞噬细胞的活性。研究发现，除正常组织表达CD47外，许多肿瘤细胞过度表达CD47，并以这种方式，传递“不要吃我”信号，从而避免被机体免疫监视发现而被先天免疫细胞杀死(免疫逃逸)。CD47抑制树突状细胞(DC)的成熟和激活。CD47还涉及细胞凋亡、存活、增殖、粘附、迁移和调节血管生成、血压、组织灌注或血小板稳态等过程。在癌症例如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、膀胱癌、前列腺癌和神经胶质瘤中，高水平的CD47与不良临床结果有关。迄今没有对于任何同时靶向MSLN和CD47的双特异性抗体。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种重组双功能融合蛋白及应用，所述融合蛋白同时与MSLN以及CD47结合，从而发挥对MSLN阳性肿瘤细胞的治疗作用，并且阻断CD47与巨噬细胞表面上的SIRP结合，刺激巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用，具有显著的抗肿瘤活性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种重组双功能融合蛋白，所述融合蛋白由抗人MSLN抗体与结合人CD47蛋白的单域结构连接而成，所述重组双功能融合蛋白包括第一结合结构域和第二结合结构域；

所述第一结合结构域特异性结合靶分子人MSLN蛋白；所述第二结合结构域特异性结合靶分子CD47蛋白。

优选的，所述结合人CD47蛋白的单域结构包括衍生自人信号调节蛋白膜外N端V样结构域(D1)。