[发明专利]双MIC结合活性的抗体及其应用

说明书

本发明公开了双MIC结合活性的抗体及其应用，抗体包括至少一个包含三个CDR的重链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区，其轻链可变区和重链可变区的CDR序列如SEQ ID NO.1～30所述。本发明的抗MIC抗体对多种MICA及MICB蛋白具有很好的亲和效果，特别是对可溶性的MICA*008、MICA*010、MICA*002、MICA*009及MICB*005有结合活性，通过吸附人血液或血浆中的NKG2D配体，包括可溶性的MICA、MICB分子及MICA/B与抗MIC单抗药物组成的免疫复合物，可以解除MIC蛋白异常升高引起的肿瘤免疫抑制作用。

技术领域

本发明涉及蛋白领域，特别涉及双MIC结合活性的抗体及其应用，具体涉及可溶性的MICA及MICB分子的异常表达相关肿瘤的治疗。通过表达抗MICA及MICB的抗体，将其偶联至固相载体上，通过免疫吸附的方式去除肿瘤患者血清中游离的可溶性MIC家族蛋白，增强NK细胞的免疫监控作用。

背景技术

癌症的防治是本世纪人类健康与寿命面临的重大难题，近年来免疫疗法提供了一种安全有效的肿瘤治疗方案。自然杀伤细胞（NK细胞）是先天免疫系统的重要成员，主要抵抗病原体和癌症。NKG2D表达于NK细胞及CD8⁺T 细胞，也表达于部分的CD4⁺T 细胞、不变的自然杀伤 T 细胞(invariant natural killer T cell，iNKT)和γδT 细胞。人类有至少8个基因编码NKG2D的配体，包括MICA、 MICB、 RAET1E、 RAET1G、 RAET1H、 RAET1I、 RAET1L和RAET1N，某些具有广泛的等位基因多态性（Lanier, L. L.，2015）。MIC 基因家族包括MICA，MICB，MICC，MICD，MICE，MICF 和MICG 7 个成员，其中只有MICA、MICB 为功能基因。NKG2D受体及其配体相互作用，可以激活免疫细胞介导的杀伤作用，同时NKG2D还可以作为协同刺激分子增强T细胞受体的信号传导，从而介导T细胞杀伤肿瘤的作用。

MIC 分子分为膜型MIC 和可溶性MIC(soluble MIC， sMIC) 两种，许多恶性肿瘤患者血清中存在sMIC。体外实验表明，在可溶性MICA或RAET1E蛋白，或包含高水平可溶性MICA的病人血清存在的情况下，NK细胞的NKG2D依赖性的细胞毒性显著下降(WANG H，2008；段小辉，2010)。因此，抑制MIC分子脱落或用抗体药物中和sMIC的方法成为治疗肿瘤的新方向，越来越受到人们的重视。

目前恶性肿瘤的治疗主要包括手术、放化疗、靶向药物以及免疫治疗等治疗手段。手术是最基本的治疗方式，但是手术的治疗要求比较早期，且患者的病变局限在局部。对于一部分中晚期的患者，在治疗过程中要使用放化疗和靶向药物治疗。对一部分局部有压迫性症状或有局部浸润转移的，也需要使用放射治疗。药物治疗方面，传统化药副作用比较大，近年来，抗体药物是肿瘤药物治疗新的研究热点。CN110088137A/WO2014140884A2及US20200165343A1公开了一种能够结合MICA/B的抗体，主要结合MICA/B蛋白的α3结构域。CN108779178A公开了一种抗MICA的抗体，主要结合MICA*001、MICA*004、MICA*007和MICA*008。CN110267678A提供了一种能够结合MICA*008、MICA*002、MICA*004及MICB*005的抗体。US20180085400A1公开了一种抗MICA抗体与CD3等分子组成的双特异性单链抗体BiTEs用于治疗癌症的方法。CN105517572A 公开了一种用于治疗癌症的中和可溶性MIC的单克隆抗体，治疗MIC阳性肿瘤。但是单抗药物需要的剂量都比较大，大剂量的抗体药物输入也存在一些安全风险。总之，肿瘤的治疗目前尚无通用的有效方式。