[发明专利]一种检测细胞内源性低丰度基因和lncRNA水平的方法

权利要求书

1.一种sgRNA响应型启动子，其特征在于，所述启动子能够响应于上游的由内源转录本控制表达的sgRNA、dCas9和转录激活因子所形成的复合物，并启动下游报告基因的表达。

2.如权利要求1所述的sgRNA响应型启动子，其特征在于，所述的sgRNA响应型启动子是miniCMV启动子。

3.一种细胞内源核酸的检测体系，其特征在于，包括：

(a)目标核酸编辑模块，包括：靶向报告系统目标核酸的sgRNA、tRNA；

其中，所述的目标核酸编辑模块中包括如式I所示的结构，

L₁-(tRNA-sgRNA)_n-tRNA-R₁ (式I)

式中，

L₁是5’端的同源臂；

R₁是3’端的同源臂；

tRNA是能成功释放出有功能的sgRNA内源机制；

sgRNA是向导RNA；

n是≥1的正整数，优选地2≤n≤10；和

(b)目标核酸报告模块，包括：一报告核酸构建物、dCas蛋白、转录激活因子；

其中，所述的报告核酸构建物具有如式II所示的结构，

(TS-I)_m-TS-P₁-Z₂ (式II)

式中，

TS是所述sgRNA的结合靶位点；

m是≥0的正整数，优选地2≤m≤4；

I是TS之间的间隔序列；

P₁是如权利要求1所述的sgRNA响应型启动子；

Z₂是报告基因序列。

4.如权利要求3所述的检测体系，其特征在于，所述细胞内源核酸包括细胞内源基因或长非编码RNA(lncRNA)。

5.如权利要求3所述的检测体系，其特征在于，所述的细胞内源低丰度基因是指当以Gapdh内参基因做相对定量时，在细胞内表达量0.001的基因。

6.如权利要求3所述的检测体系，其特征在于，所述(a)中的sgRNA靶向于所述目标核酸的3’端未翻译区域(3’UTR)。

7.一种用于检测细胞内源核酸的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求3所述的检测体系。

8.一种检测细胞样本中是否存在目标内源核酸的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)将权利要求3所述的检测体系引入待检测细胞样本中；和

(ii)检测所述检测体系中的检测目标核酸报告模块中的报告基因或其编码产物的水平。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法包括动态检测细胞样本中的目标内源核酸的水平。

10.如权利要求1所述的sgRNA响应型启动子或如权利要求3所述的检测体系的用途，其特征在于，用于制备一试剂盒，所述的试剂盒用于检测细胞内源核酸。