[发明专利]一种鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的建立方法

说明书

本发明属于生物技术领域公开了一种鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的建立方法，该方法主要以鸡白痢沙门氏菌C79‑3作为攻毒菌株，选择11日龄SPF鸡胚为感染动物，通过蛋壳接触的方法进行攻毒。攻毒后孵化雏鸡表现出拉灰白稀粪，粪便黏连肛门，精神沉郁，羽毛逆立症状，剖检死亡雏鸡具有鸡白痢特征性病变，模型稳定可靠。该模型可为药物预防和治疗雏鸡鸡白痢的研究提供研究工具。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的建立方法。

背景技术

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的一种急性、全身性疾病，以经卵垂直传播和经消化道的水平传播为主，各年龄阶段的鸡均可感染，其中2-3周龄以内的雏鸡感染率和死亡率极高，雏鸡感染后主要表现为拉灰白色稀粪、精神沉郁、羽毛逆立、畏寒扎堆等症状；成年鸡通常呈隐形感染或慢性感染，通常不表现症状，但会导致产蛋量和孵化率下降，同时带菌母鸡可经卵垂直传播给鸡胚，经胚胎感染的雏鸡孵出后成为弱雏，大多在1-2日内死亡或成为带菌鸡通过粪便、饮水、饲料等水平传播方式感染鸡群，给我国养禽业带来巨大的经济损失。

目前已知的鸡疾病模型的建立方法多以出壳的幼龄雏鸡或成年雏鸡作为实验动物，以口服滴喂或注射的途径攻毒，少有以鸡胚为试验动物进行鸡白痢沙门氏菌感染模型的建立，其中以蛋壳接触接种的方式进行鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的建立鲜有报道。而据临床实践研究显示垂直传播是鸡白痢沙门氏菌病重要的传播方式，带菌种鸡可将鸡白痢沙门氏菌垂直传播给种蛋，从而孵出的蛋菌雏鸡，其胎粪、绒毛、蛋壳中都含有大量的鸡白痢沙门氏菌，进而感染同群鸡群；而本鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的建立，通过蛋壳接触接种的方式可模拟带菌种鸡以及蛋壳污染的传播模式。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何建立鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型，为雏鸡鸡白痢的药物防治的研究提供基础。

为达到上述目的，本发明所采用的的技术方案是：

一种鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的建立方法，选择鸡白痢沙门氏菌C79-3作为攻毒菌株，选择SPF鸡胚为攻毒动物，攻毒方法为蛋壳接触接种，攻毒后每日观察鸡胚死亡情况；待鸡胚孵出后，观察雏鸡的精神状态和粪便情况，对死亡雏鸡进行剖检，将死亡雏鸡脏器研磨液进行PCR扩增检测。

一种鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型的构建方法，选择鸡白痢沙门氏菌C79-3作为攻毒菌株，以SPF鸡胚为试验动物，通过蛋壳接触方式进行攻毒，孵出后雏鸡表现出持续拉灰白、黄白或白绿色稀粪，精神沉郁，食欲不振，糊肛症状，剖检死亡雏鸡有鸡白痢特征病变并且可分离到鸡白痢沙门氏菌，即可得到鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型。

进一步的，所述SPF鸡胚为11日龄SPF鸡胚。

进一步的，所述蛋壳接触接种方式为鸡胚于无菌蛋托中，完全浸泡在菌液中2min。

进一步的，菌液浓度为9×10⁵CFU/mL。

进一步的，PCR检测的引物如下：

上游引物：ipaJ F:5’-TACCTGTCTGCTGCTCCG-3’

下游引物：ipaJ R:5’-ACCCTGCAAACCTGAAATC-3’。

进一步的，攻毒方法为蛋壳接触接种：将从恒温孵育箱中取出的11日龄SPF鸡胚，于无菌蛋托中，完全浸泡于4℃菌液中2min，待自然干燥后，重新置于恒温孵育箱中孵育。