[发明专利]液相色谱-质谱联用的分析方法、装置及其控制系统和方法

权利要求书

1.一种液相色谱-质谱联用的分析方法，包括：将待测生物样品经一维液相色谱分离得到的一维洗脱液，再进行二维液相色谱分离后进行串联在线质谱分析，其特征在于，所述的一维洗脱液直接进行串联在线酶解和在线捕集，对捕集后的酶解成分再进行串联在线所述二维液相色谱分离；

所述的在线酶解的压力至少为3000psi，较佳不超过15000psi，更佳为5000～7000psi；优选地，所述的一维液相色谱的压力至少2000psi，较佳不超过13000psi，更佳为4000～7000psi；更优选地，所述的二维液相色谱的压力至少为2500psi，较佳不超过15000psi，更佳为4500～5000psi；

所述待测生物样品优选为10～250kD的蛋白样品，更优选为50～200kD的蛋白样品，特别是具有电荷异质性的蛋白样品，例如抗体或抗体偶联药物。

2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述的在线酶解通过在线酶解柱进行，所述的在线酶解柱的配基优选为胃蛋白酶或胰蛋白酶，所述的在线酶解柱更优选为亚乙基桥杂化颗粒胃蛋白酶酶解柱；

和/或，所述的在线捕集通过在线捕集柱进行，例如亚乙基桥杂化颗粒C18捕集柱；

和/或，所述的一维液相色谱分离通过pH梯度阳离子交换色谱柱进行，优选为WCX-NP1.7抗体分析柱；

较佳地，所述的分析方法包括以下步骤：

1)所述的一维液相色谱分离通过：

S1：将所述待测生物样品通过一维液相色谱柱进行分离，优选通过与所述一维液相色谱柱相连的一维分离检测器、例如荧光检测器监控分离状态并得到实时检测谱图；

S2：根据S1得到的实时检测谱图，优选通过第一阀组阀切断开所述一维液相色谱柱与一维分离检测器的连接、并对指定组分进行中心切割，得到一维洗脱液；更佳地，所述中心切割结束后通过第一阀组阀切将所述一维液相色谱柱接回荧光检测器；

2)所述的在线酶解通过：

S3：将S2得到的一维洗脱液与在线酶解的酶解缓冲液混合形成酶解液，流入串联的在线酶解柱进行酶解，得到酶解洗脱液；优选地，所述的在线酶解柱的配基为胃蛋白酶时，所述的酶解液pH不超过4.5，优选为2.5～4.5，更优选为4.4；

3)所述的在线捕集通过：

S4：将S3得到的酶解洗脱液流入串联的在线捕集柱进行酶解成分例如肽段的捕集；

4)所述的二维液相色谱分离和质谱分析通过：

S5：将S4中捕集的成分通过串联的二维液相色谱柱分离后依次被串联的二维分离检测器例如紫外检测器，以及质谱分析装置获取信号，得到二维色谱分离产物即待测样品的表征图谱；

更佳地，S4时所述一维液相色谱柱以初始流动相比例进入再平衡状态，等待下一次进样分析，回到S1；

和/或，S4和S5之间还包括S41步骤：优选通过第二阀组阀切，将所述在线酶解柱与在线捕集柱连接断开，在线酶解柱进入再平衡状态，等待下一次进样分析；

优选地，S4中未被捕集的成分作为废液优选通过反压器流出；

和/或，S5时，不执行分离功能的一维液相色谱柱和在线酶解柱均处于平衡状态。