[发明专利]采用丝状真菌菌株生产酶的方法

权利要求书

1.采用属于丝状真菌家族的微生物菌株生产纤维素分解酶和/或半纤维素分解酶的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)在至少一种碳基生长基质的存在下，在搅拌和曝气生物反应器中，在含水培养基中生长真菌，特别是以分批模式生长真菌的第一步骤，

(b)在至少一种诱导性碳基基质的存在下，由第一步骤(a)中获得的含水培养基开始，生产酶以及诱导产生疏水蛋白的第二步骤，

其特征在于，在步骤(d)中，将步骤(b)中产生的疏水蛋白的至少一部分重新引入到生长步骤(a)中。

2.根据前一权利要求的方法，其特征在于，所述方法包括在酶生产步骤(b)之后且在重新引入疏水蛋白的步骤(d)之前的至少一个分离出疏水蛋白，特别是液相形式的疏水蛋白的步骤(c)，对来自生产步骤(b)的培养基，特别是通过对所述培养基进行一次或多次连续过滤来实施所述步骤(c)。

3.根据前一权利要求的方法，其特征在于，通过从生产步骤(b)的培养基中以液相形式直接分离疏水蛋白的至少一部分来实施分离出疏水蛋白的步骤(c)。

4.根据权利要求2的方法，其特征在于，所述方法包括在生产步骤(b)之后且在重新引入疏水蛋白的步骤(d)之前的分离步骤(c)，所述分离步骤(c)包括一方面是真菌以及另一方面是培养基的剩余部分之间的第一分离子步骤(c1)，然后是一方面是疏水蛋白、特别是液相形式的疏水蛋白以及另一方面是酶之间的所述培养基的剩余部分的第二分离子步骤(c2)。

5.根据权利要求2-4之一的方法，其特征在于，所述分离步骤(c)包括进行至少一次将所述疏水蛋白从存在其的液体培养基中超滤，从而以液相形式分离出所述滤液中的疏水蛋白，所述超滤特别采用具有3-30kDa、特别是5-15kDa的截留阈值的滤膜进行。

6.根据权利要求4的方法，其特征在于，通过过滤，特别是采用压滤机来实施真菌和培养基的剩余部分之间的分离子步骤(c1)。

7.根据权利要求2-6之一的方法，其特征在于，在分离步骤(c)之后分离出且重新引入到步骤(a)的培养基中的步骤(d)之前的疏水蛋白为液相形式，其任选地被中间储存、稀释和/或浓缩。

8.根据前述权利要求之一的方法，其特征在于，在生产步骤(b)中产生且被重新引入到生长步骤(a)中的疏水蛋白主要是，特别基本上是II型疏水蛋白。

9.根据前述权利要求之一的方法，其特征在于，所述生长步骤(a)和/或所述生产步骤(b)以分批、分批补料或连续模式或以这些模式中的若干种模式依次进行。

10.根据前述权利要求之一的方法，其特征在于，在步骤(d)中，贯穿所述生长步骤(a)的持续时间，将疏水蛋白连续地、单次地或依次地重新引入到生长步骤(a)的培养基中。

11.根据前述权利要求之一的方法，其特征在于，将在生产步骤(b)中产生的疏水蛋白以从步骤(b)的培养基获得的含水相滤液的形式重新引入到生长步骤(a)中，生长步骤(a)的培养基中的水全部或部分来自所述滤液。

12.根据前述权利要求之一的方法，其特征在于，将疏水蛋白以在含水培养基中浓度为10-400mg/l、优选50-200mg/l的溶液形式重新引入到生长步骤(a)中。

13.根据前述权利要求之一的方法，其特征在于，在所述生长步骤(a)期间，所述碳基生长基质的浓度为15-100g/l，并且所述生产步骤(b)采用受限的、特别是30-140mg·g^-1·h^-1、优选35-45mg·g^-1·h^-1的诱导性碳基基质料流进行，并且优选使用一种或多种碳基基质的浓度为200-700g/l的水溶液进行。