[发明专利]一种银杏内酯的检测方法

说明书

本发明涉及一种银杏内酯的检测方法，属于复杂样品前处理及药物分析化学领域，具体步骤包括对银杏叶提取物检测前的提取、净化和检测，本发明对银杏叶提取物中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C具有稳定、良好的提取及净化能力，检测结果稳定性好，精确度和准确性明显提升，RSD可小于0.5%。

技术领域

本发明涉及一种银杏内酯的检测方法，属于复杂样品前处理及药物分析化学领域。

背景技术

银杏是一种裸子植物落叶乔木，我国自古以来就有银杏叶入药和食疗的记载。20世纪70年代初在国外特别是欧洲利用银杏叶提取物来治疗心脑血管疾病包括脑血管动脉粥样硬化和中枢外周血流紊乱的研究出现，其药用价值受到了更为广泛的关注。银杏叶提取物的有效成分主要包括黄酮类和萜类内酯类等，其中萜类内酯类为血小板活化因子及甘氨酸受体特异性拮抗剂，具有广泛的药理作用，在预防、治疗心脑血管疾病及保护中枢神经系统方面显示了较好的市场前景。因此，实现对银杏叶提取物中萜类内酯总含量的准确测定是银杏叶制剂质量控制的关键指标之一，其中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C四种成分的总含量则是常用的评价指标。

由于植物自身成分极为复杂，实现对银杏叶提取物所含白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的准确测定必然需要依托一定的分离净化手段。目前常用的前处理方法主要参考《中国药典》，但是在应用的过程中发现，由于前处理相对简单，只依靠乙酸乙酯固液萃取，并不能实现很好的净化效果，检测稳定性也较差，日间RSD的5％～10％左右。同时经过研究发现，该方法中的4次乙酸乙酯萃取并不能将银杏内酯充分萃取，随着萃取遍数的增加，内酯含量持续增加，说明银杏内酯的含量检测结果偏低。目前国内外的研究也一直围绕在银杏内酯的前处理方法上，如引入硅藻土、树脂、固相萃取、结晶等净化手段，但是目前仍然没有对其有较大的改善。

本申请为解决这一难题，将银杏内酯的前处理方法进行一系列的改进，最终使银杏内酯的检测精度和准确性得到明显提升。

发明内容

本发明的目的是提供一种银杏内酯的检测方法，包括检测前的提取、净化步骤和检测步骤，主要用于银杏叶提取物中萜类内酯类的准确定量，尤其是白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C四种成分的含量的准确测定。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种银杏内酯的检测方法，包括以下步骤：

(1)称取银杏叶提取物，并向其中加入90％的甲醇水溶液，超声处理10min，然后再加入pH值为4.8～6.2的10～50mmol/L磷酸盐缓冲溶液形成银杏叶提取物分散液；

(2)向步骤(1)的分散液中加入Merck硅藻土，将其置于振荡器中，在一定的条件下处理30～60min，然后将其转移至滤纸筒中；

(3)将步骤(2)的滤纸筒装入索氏提取装置，以乙酸乙酯为溶剂，在一定温度下索氏抽提0.5～3h，提取结束后将得到的提取液冷却至室温；

(4)将步骤(3)得到的提取液浓缩至固含量大于90％，然后加入50％的甲醇水溶液溶液，在4～10℃、10000rpm下离心5～10min，得上清液；

(5)将步骤(4)得到的上清液利用PTFE材质的滤膜过滤后，利用高效液相串联蒸发光散射检测器进行检测得到各组分的色谱峰。

(6)根据步骤(5)得到的色谱峰，通过峰面积对其中的白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B以及银杏内酯C的含量分别进行计算，加和得到银杏内酯的含量。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(1)中90％的甲醇水溶液与银杏叶提取物的体积质量比为1:1～8:1，所述磷酸盐缓冲溶液与银杏叶提取物的体积质量比为20:1～400:1。

本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤(2)中Merck硅藻土与银杏叶提取物的质量比为50:1～500:1。