[发明专利]Crx、c-Myc、Nr2e1和Mitf-a转录因子组合的应用

说明书

本发明提供Crx、c‑Myc、Nr2e1和Mitf‑a转录因子组合的应用，本发明还提供一种制备iRPE细胞的方法。本发明将四种因子组合，具有抗TGFβ诱导的EMT的功能，并且能够诱导脱分化RPE细胞分化为功能性RPE细胞。

技术领域

本发明涉及一种Crx、c-Myc、Nr2e1和Mitf-a转录因子组合的应用，属于生物医药领域。

背景技术

年龄相关性黄斑变性(Age-related macular degeneration,AMD)是以视网膜色素上皮细胞(Retinal pigment epithelial cells,RPE)和视网膜光感受器细胞功能丧失而引起视功能损害为共同表现。我国流行病学调查显示，50岁以上人群中，AMD的发病率高达11.4％－15.6％。AMD往往会导致严重的视力损害，最终会致盲，从而严重地影响患者的生活质量，并成为家庭和社会的负担。尽管临床上已开展针对AMD的治疗，但仍缺乏有效的治疗和预防措施。

考虑到RPE细胞是单层细胞，且不需要同感光细胞一样要建立突触连接，因而临床上最早采用人眼中分离的RPE细胞来移植治疗以RPE病变为主的AMD，但限于取材困难，一直不能获得广泛的应用。胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和诱导多能性干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)可以高效分化为RPE细胞，多个临床试验将ESCs和iPSCs来源的RPE细胞用于治疗AMD。但是研究显示，移植治疗的效果并不明显，主要的原因可能同RPE易发生上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关。

RPE细胞具有典型的上皮细胞结构，体内形成单层柱状六边形结构，并维持顶端到基底端的极性。EMT过程包含上皮细胞之间的胞间连接解体，粘附力降低，细胞失去顶端-基底端极性，获得前沿-后延极性，细胞骨架重塑，形态发生变化，获得间质细胞标记，迁移能力增强。在干性AMD起始阶段，RPE细胞即可发生病变并发生EMT，特别是随着AMD的进展，在地图样萎缩区域周边的RPE细胞发生不规则形态的改变，RPE细胞从Bruch膜上脱离，形成多层结构或迁移进入神经视网膜或进入Bruch膜，RPE细胞表达间质细胞标记分子，细胞极性丢失，上皮细胞功能减弱，获得较强的迁徙能力。而在湿性AMD中，在视网膜下腔及RPE下方会形成脉络膜新生血管组织，导致视网膜下纤维化组织形成。手术剥离的脉络膜新生血管膜组织中包含RPE细胞及RPE细胞来源的肌成纤维细胞，证实RPE细胞发生了EMT。一旦发生EMT，RPE细胞丧失极性，对感光细胞的支持功能降低，诱发感光细胞凋亡，促进疾病的发展，因而RPE细胞的EMT过程一直是治疗AMD的靶点。转化生长因子-β(Transforming growthfactor-β,TGFβ)信号通路是经典的诱导EMT的信号通路，是促进AMD疾病发展的重要细胞因子。TGFβ可以激活SMAD2/3的磷酸化，后者入核调控EMT相关蛋白的表达，诱导RPE细胞发生EMT。

发明内容

本发明的目的在于提供Crx、c-Myc、Nr2e1和Mitf-a转录因子组合的应用，从而为年龄相关性黄斑变性提供新的治疗方案。

本发明采用了如下技术方案：

本发明提供一种Crx、c-Myc、Nr2e1和Mitf-a转录因子的组合在制备诱导脱分化RPE细胞分化为成熟RPE细胞的试剂中的应用。

本发明还提供一种Crx、c-Myc、Nr2e1、Mitf-a转录因子组合在制备抗上皮间质转化的试剂中的应用。

上述的应用，还具有这样的特征：上皮间质转化指视网膜退行性疾病中体内上皮细胞的病理过程，所述上皮细胞包括视网膜色素上皮细胞。

本发明还提供过表达Crx、c-Myc、Nr2e1、Mitf-a转录因子组合的试剂在制备诱导间质上皮转化获得具有抗EMT功能的iRPE细胞的试剂中的应用。