[发明专利]重组人干扰素α2b的快速纯化方法

权利要求书

1.一种重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，步骤如下：收集发酵生产的菌体，用提取缓冲液重悬菌体，通过高压均质机破碎菌体后，高速离心去除沉淀，收集上清液过滤，滤液经层析分离获得纯化的重组人干扰素α2b。

2.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述提取缓冲液为20-50 mM磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于所述重悬菌体过程如下：称取合适的菌体按1g菌体加入5-15倍量的提取缓冲液至搅拌罐中，pH为6-8，搅拌速度为100-300 rpm/min、搅拌时间1-3hr，控制温度为30℃。

4.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述高压均质机破碎菌体过程如下：使用高压均质机破碎菌体，压力为500-1000 bar，循环破碎1-5次。

5.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述高速离心去除沉淀过程如下：使用落地离心机，8000-14000 rpm/min离心10-30 min。

6.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述收集上清液过滤过程如下：收集上清液，使用0.2-1.0 μm PES过滤膜过滤。

7.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述层析分离使用cytiva lifesciences生产的Ni Sepharose excel系列的填料。

8.根据权利要求1所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述层析分离条件如下：

流速为30-150cm/hr；

层析填料为cytiva lifesciences生产的Ni Sepharose excel系列的填料，色谱柱体积35mL；柱直径：26mm；

缓冲液为：

溶液A：50mM PB+0.15M NaCl（pH 7.5）

溶液B：50mM PB+0.15M NaCl+30mM咪唑（pH 7.5）

溶液C：50mM PB+0.15M NaCl+100mM咪唑（pH 7.5）

溶液D：50mM PB+0.15M NaCl+0.8M咪唑（pH 7.5）

溶液E：20%乙醇溶液。

9.平衡：用溶液A平衡3-10倍柱体积，

上样：将过滤后的样品溶液400ml 上样，

洗涤：上样后用溶液A清洗3-10倍柱体积，

除杂：用溶液B进行除杂步骤3-5倍柱体积，

洗脱：用溶液C进行洗脱步骤3-10倍柱体积，

再生：用溶液D清洗2-5倍柱体积；再用溶液A清洗2-5倍柱体积；再用溶液E冲洗3-5CV，保存。

10.根据权利要求8所述重组人干扰素α2b的快速纯化方法，其特征在于，所述层析分离条件如下：

流速为60-150cm/hr；

层析填料为cytiva lifesciences生产的Ni Sepharose excel系列的填料，色谱柱体积35mL；柱直径：26mm；

缓冲液为：

溶液A：50mM PB+0.15M NaCl（pH 7.5）

溶液B：50mM PB+0.15M NaCl+30mM咪唑（pH 7.5）

溶液C：50mM PB+0.15M NaCl+100mM咪唑（pH 7.5）

溶液D：50mM PB+0.15M NaCl+0.8M咪唑（pH 7.5）

溶液E：20%乙醇溶液。