[发明专利]一种狼疮抗凝物的筛选试剂及其制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种狼疮抗凝物的筛选试剂及其制备方法。该筛选试剂包括三羟甲基氨基甲烷、凝血因子X激活剂、兔脑磷脂、明胶、甘氨酸、海藻糖、硫柳汞钠、氯化钙。本发明狼疮抗凝物的筛选试剂盒通过调整稳定剂的浓度和组分，使狼疮抗凝物筛选试剂盒稳定性好、抗干扰能力强，试剂复溶2‑8℃放置可以稳定10天，冻干粉2‑8℃放置可以稳定2年。本发明稳定性优于一般的市售产品，使试剂得到充分利用，减少了试剂浪费，使医院很好的节约成本。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种狼疮抗凝物的筛选试剂及其制备方法。

背景技术

狼疮抗凝物质(LA)是病理性循环抗凝物质，为IgG、IgM或两者混合型。LA通过识别磷脂结合凝血酶原，阻断活化的凝血因子Ⅴ与凝血酶原作用，抑制纤维蛋白的形成，在体外干扰APTT、PT、dRVVT凝血试验，致使凝血时间延长。

在体内，LA可激活血小板和(或)通过β2-GPI结合，诱导黏附分子、组织因子表达及补体活化而产生血栓前状态，促进血栓形成。LA与血管内皮细胞膜磷脂作用，干扰内皮细胞释放纤溶酶原激活物而抑制纤溶；LA与血小板膜磷脂作用，干扰花生四烯酸代谢，促进血小板活化；LA可抑制与磷脂相关的内源性抗凝物质，使血液凝固性增强。LA检测阳性患者中约有1/3发生血栓，最常见的是深静脉血栓、肺栓塞及大血管血栓、血小板减少症、产科表现为不明原因的习惯性流产、死胎、胎儿发育迟滞。因此，提供一种LA的检测试剂具有重要的现实意义。

检测原理：在受检血浆中加入筛选试剂(LAS)，凝血因子X激活剂直接激活凝血因子X成为活化的凝血因子X，在钙和磷脂的参与下使血液凝固，测定凝固时间，血浆中如果存在狼疮抗凝物(LA)，测定血浆凝固时间会超出正常参考范围，血浆中如果不存在狼疮抗凝物(LA)，则测定血浆凝固时间在正常参考范围内。

现有的狼疮抗凝物筛选试剂存在稳定性差的问题，而且标本中的血红蛋白、胆红素、甘油三酯、肝素会干扰检测结果的准确性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种狼疮抗凝物的筛选试剂及其制备方法。该狼疮抗凝物筛选检测试剂(LAS)具有高稳定性、对其它干扰物质的抗干扰能力强、高灵敏度的优点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种狼疮抗凝物的筛选试剂，包括凝血因子X激活剂、兔脑磷脂、缓冲液、明胶、甘氨酸、海藻糖、硫柳汞钠和氯化钙；

筛选试剂中各组分用量为：

在本发明中，检测试剂中脑磷脂选自兔脑磷脂，相比卵磷脂、猪脑磷脂、牛脑磷脂、大豆磷脂、花生磷脂、合成磷脂等，兔脑磷脂配合本发明筛选试剂中其它试剂后使得筛选试剂的稳定性更强，从而本发明试剂具备了稳定性好、保质期长等特点；

检测试剂中缓冲液为Tris-Hcl缓冲溶液，相比磷酸盐缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、HEPES缓冲液，PH为7.4的Tris-HCl缓冲液配合本发明筛选试剂中其它试剂后使得筛选试剂的稳定性更强，从而本发明试剂具备了稳定性好、保质期长等特点；

现有技术中，冻干保护剂、稳定剂一般有糖类(蔗糖、海藻糖、乳糖、葡萄糖等)、聚合物类(聚乙二醇、pvp、明胶、聚乙烯亚胺等)、氨基酸类(甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、懒氨酸等)，本发明优选明胶、甘氨酸、海藻糖的组合作为本发明冻干保护剂、稳定剂，配合本发明筛选试剂中其它试剂后使得筛选试剂的稳定性更强，从而本发明试剂具备了稳定性好、保质期长等特点；

检测试剂中防腐剂优选硫柳汞钠，相比叠氮钠、硫柳汞钠、山梨酸钾、乳酸钠等防腐剂有，硫柳汞钠作为本发明的防腐剂，配合本发明筛选试剂中其它试剂后使得筛选试剂的稳定性更强，从而本发明试剂具备了稳定性好、保质期长等特点。

作为优选，筛选试剂中各组分用量为：