[发明专利]抗人血清白蛋白单克隆抗体有效
| 申请号： | 202011247464.4 | 申请日： | 2020-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN112480247B | 公开（公告）日： | 2023-09-22 |
| 发明（设计）人： | 于在林;富岩;杨小楠;侯琼;富俞淞;陈颖 | 申请（专利权）人： | 华通福源生物技术（北京）股份有限公司;天津溥瀛生物技术有限公司;北京美福源生物医药科技有限公司;天津林达生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N5/20;G01N33/68 |
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| 地址： | 100026 北京市朝阳区霄云*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清 白蛋白 单克隆抗体 | ||
1.一种人血清白蛋白氨基酸序列在制备抗人血清白蛋白单克隆抗体中的应用，其特征在于，包括如下步骤：采用人工合成的多肽氨基酸序列：
SEQ ID No. FR1028: CFAEEGKKLVAASQAALGL 作为人血清白蛋白表面抗原决定簇的氨基酸序列；
合成10mg如SEQ ID No. FR1028所示的短肽，其中10mg中的5mg短肽经化学偶联KLH；
将200μg偶联KLH的短肽+弗氏完全佐剂等体积混合并充分乳化，对小鼠实施基础免疫，方法是腹腔注射BalB/c小鼠，每次注射体积为0.2ml，每个短肽同时免疫5只小鼠；免疫抗原偶联KLH的短肽与弗氏不完全佐剂等体积混合并充分乳化，做二次免疫为每隔2周腹腔注射1次，每次注射体积为0.2 ml，偶联KLH的短肽用量为100μg/只；将免疫原偶联KLH的短肽与浓度为0.9%的生理盐水混合，在进行细胞融合前3天，对小鼠进行加强免疫，腹腔注射，偶联KLH的短肽用量为100μg/只；
二免后适时经小鼠眼底采血，离心取血清后测小鼠免疫效果；具免疫反应的小鼠按常规技术收集免疫小鼠的脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞按6:1的比例，用聚乙二醇制剂
进行融合；用HAT培养液选择培养；融合后7-14天，取细胞培养上清，采用间接ELISA方法筛选分泌抗HSA的杂交瘤细胞株，对所得阳性克隆株采用有限稀释法进行亚克隆，获得单克隆抗体杂交瘤细胞株。
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