[发明专利]用于诊断FAP表达异常相关疾病的试剂盒、方法及计算机可读存储介质

说明书

本发明公开了能够与成纤维细胞激活蛋白（FAP）抗体结合的蛋白或多肽在制备用于诊断FAP异常表达相关疾病的试剂盒中的应用。利用能够与FAP抗体结合的蛋白或多肽，通过检测FAP自身抗体的存在来诊断FAP表达异常相关的疾病。本发明提供了更加高效、便捷的FAP异常表达相关疾病诊断方法。

技术领域

本发明涉及FAP表达异常相关疾病的诊断试剂盒、诊断方法和计算机可读介质，更具体地，涉及通过检测FAP自身抗体的存在来诊断FAP表达异常相关的疾病。

背景技术

成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation protein，FAP)，也称为Seprase，单体为97kDa，需要二聚化才能发挥酶活性。FAP是一种膜整合型丝氨酸肽酶，与二肽基肽酶IV(DPPIV，也称为CD26)(一种密切相关的细胞表面酶)和其他肽酶一起，属于二肽基肽酶IV家族。FAP含有两个具有大的C末端胞外域的N-糖基化亚基，酶的催化域位于其中。FAP以其糖基化形式具有二肽基肽酶和内肽酶活性，可裂解明胶和I型胶原。人FAP在细胞上以同源二聚体形式存在，其每个单体包含760个氨基酸残基，其中包含：仅6个氨基酸的短胞质尾、20个氨基酸的单个跨膜结构域、以及734个氨基酸的胞外结构域。晶体结构测定表明，FAP的胞外结构域包含两个结构域：一个α/β水解酶结构域(残基27-53和493-760)和一个八叶β螺旋桨结构域(残基54-492)，它们围成一个直径约的大空腔。在该空腔中的一个小袋中，在α/β水解酶和β-螺旋桨结构域的界面，包含一个催化三联体，由残基Ser624、Asp702和His734组成。除了催化三联体之外，残基Ala657、Asn704、Arg123、Glu203和Glu204都是FAP催化活性所必需的。可以通过侧面开口进入该腔，仅允许伸长的肽或未折叠或部分未折叠的蛋白质片段到达活性位点腔。FAP在Asn残基49、92、99、227、314和679处包含六个潜在的N-连接糖基化位点(基序Asn-X-Ser/Thr)。这些位点中的大多数位于β-螺旋桨表面，只有一个在水解酶结构域上，靠近细胞表面。在杆状病毒表达的可溶性人FAP中，除Asn99以外的所有氨基酸都被糖基化。

FAP具有独特的组织分布，在超过90％的所有原发性和转移性上皮肿瘤(包括肺癌、结直肠癌、膀胱癌、卵巢癌和乳腺癌等)的反应性基质成纤维细胞上，其表达高度上调，而通常不存在于正常的成人组织中。有报道表明，FAP不仅在间质成纤维细胞中表达，而且也在上皮起源的某些类型的恶性细胞中表达，并且FAP的表达与恶性表型直接相关。

自身抗体是指针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体。人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。一旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体，但不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某一水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。

大量研究表明，血清中的疾病相关抗原能诱导机体产生自身抗体，在患者血清中既存在抗原，也存在针对该抗原的自身抗体。因此，既可以利用抗体检测抗原，也可以利用抗原检测自身抗体，但利用自身抗体检测疾病的特异性和敏感性均比利用抗原检测疾病要高得多。很多疾病相关抗原不仅在患者体内存在，在正常人体内也存在，因此检测疾病相关抗原作为诊断依据可信性差。而自身抗体在正常人体内含量很低检测不到或根本不存在，若体内自身抗体水平明显增高，则表明体内存在异常免疫情况，表明体内相关抗原水平发生波动，预示疾病的存在或原有疾病加重。以自身抗体作为疾病标志物的主要优点有：特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好、检测速度快、假阳性率低。通过血清中自身抗体的水平变化可以对疾病的不同阶段进行监测，可以对疾病进行早期诊断，有利于疾病的早期治疗，改善患者的预后。

目前尚没有关于FAP自身抗体的报导，更没有尝试通过FAP自身抗体来诊断FAP表达异常相关的疾病。

发明内容