[发明专利]一种菜心高效遗传转化方法

说明书

本发明公开了一种菜心高效遗传转化方法，对种子进行灭菌操作后，将种子均匀播种到播种培养基中；通过侵染和培养步骤完成共培养的过程；子叶插入预培养基中进行预培养；将经过预培养步骤后的外植体转入分化培养基上，置于组培室培养，观察不定芽的生长情况；等外植体长出完整的绿芽后，将带芽的外植体切下，转到生根培养基上，置于人工气候室继续培养至发根；最后进行移栽。通过上述设置，能够快速高效的完成对于菜心的遗传转化过程，节省操作时间，具有良好的经济效益，适于推广。

技术领域

本发明涉及转基因作物领域，具体为一种菜心高效遗传转化方法。

背景技术

菜心又名菜薹，十字花科芸薹属，一、二年生草本植物。适合播种在南方温暖的地区，是我国南方的特产蔬菜之一。一年四季均可播种，现世界各地均有引种栽培。

菜心每千克可食用部分含蛋白质13-18克、脂肪1-5克、碳水化合物20-45克，还含有一定的钙、磷、铁和各种维生素，是营养价值高且市场收益率高的蔬菜。菜心的品质指标通常包括还原糖、可溶蛋白、可溶固形物、维生素C、粗纤维等指标。口感好的菜心通常具有较高含量的可溶蛋白、可溶糖、维生素C和较低含量的粗纤维。

遗传转化，是指同源或异源的游离DNA分子(质粒和染色体DNA)被自然或人工感受态细胞摄取，并得到表达的水平方向的基因转移过程。

通过遗传转化，转基因生物在能够保留原有的各种优良性状的前提下，同时又增加一个目的基因控制的性状。从而能够为转基因生物提供例如抗旱、抗寒或者抗虫等生物特性，进而增强生物的生存能力。

本申请中，旨在针对性的为菜心的遗传转化提供一中能够高效实现的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种菜心高效遗传转化方法，其能够快速高效的完成对于菜心的遗传转化过程，节省操作时间，具有良好的经济效益，适于推广。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种菜心高效遗传转化方法，包括以下步骤：

S0、培养基配置：本步骤中灭菌指的是高压灭菌锅保持121℃持续20min灭菌；

播种培养基每升：MS519 4.43g+蔗糖20.00g+琼脂粉9.30g，调整pH为5.8，灭菌；

共培养基每升：播种培养基+1mL6-BA+450μLNAA，调整pH为5.8，灭菌后加1mLAgN0₃；

预培养基每升：播种培养基+1mL6-BA+450μLNAA，调整pH为5.8，灭菌后加1mLAgN03+1mL头孢；

分化培养基每升：播种培养基+1.25mL6-BA+450μLNAA(调整pH：5.8)，灭菌后加1mLAgN03+1mL头孢+100μLKana；

生根培养基每升：播种培养基+100μLNAA，灭菌后加1mL头孢；

液体MS每升：MS519 4.43g+蔗糖20.00g，调整pH为5.8，灭菌；

S1、播种：对种子进行灭菌操作后，将种子均匀播种到播种培养基中，培养条件：温度为25士1℃；光周期为16h光照/8h黑暗；光强为30μmol·m^-2·s^-1；

S2、共培养：

S2.1、稀释菌液：将S1中的菌液在摇床上摇至OD600：1.2-1.4，将液体MS和菌液以一定比例稀释作为侵染液；

S2.2、分离子叶：取生长点将要开始露绿时的芽苗，在灭菌后超净工作台上，用手术刀切下不带子叶柄的子叶作为外植体，以下简称子叶；

S2.3、侵染：将子叶浸没在侵染液中侵染；