[发明专利]细胞有序排列及转印方法

权利要求书

1.一种细胞有序排列及转印方法，用于向靶向部位处提供有序排列的细胞，其特征在于，所述细胞有序排列及转印方法包括如下步骤：

转印母版的制备，所述转印母版包括阳性转印母版和阴性转印母版；所述转印母版的制备步骤包括：所述阳性转印母版的制备：将细胞与磁性纳米颗粒共培养，再利用预设强度的磁场筛选与磁性纳米颗粒共培养的细胞，得到磁化的细胞；提供微磁体网膜，所述微磁体网膜包括底膜、以预设形状有序分布在所述底膜上的磁性颗粒以及覆盖于所述磁性颗粒上的覆盖膜；将磁化的细胞与所述微磁体网膜结合，所述细胞以预设形状有序排布在所述微磁体网膜的表面，得到阳性转印母版；

或所述阴性转印母版的制备：提供母版膜，所述母版膜为具有生物相容性的半透膜，所述半透膜上具有孔隙；在所述母版膜上培养细胞，并使所述细胞均匀分布在所述母版膜上；按照预设形状刮除、铲除、剔除所述母版膜上对应的细胞或者按照预设形状用细胞消化液消化所述母版膜上对应的细胞，使未被刮除、铲除、剔除或未被消化的细胞以预设形状有序排布在所述母版膜上，得到阴性转印母版；

细胞的转印，提供生物胶，在所述靶向部位涂覆所述生物胶，再将所述阳性转印母版或者所述阴性转印母版贴附于涂有所述生物胶的靶向部位，使所述阳性转印母版或者所述阴性转印母版表面有序排布的细胞与所述生物胶结合，以使所述细胞转印至所述靶向部位。

2.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，在所述阳性转印母版的制备步骤中，所述磁性纳米颗粒为Fe₃O₄磁性纳米颗粒。

3.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，在所述阳性转印母版的制备步骤中，用于磁化的细胞为贴壁细胞时，先将所述贴壁细胞用0.25％胰蛋白酶和0.01％乙二胺四乙酸消化，加入完全培养基终止消化，离心去上清，加入完全培养基重悬，再与所述磁性纳米颗粒共培养。

4.根据权利要求3所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，所述离心的速率为150g-200g，离心的时间为5min。

5.根据权利要求3所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，所述贴壁细胞与所述磁性纳米颗粒共培养后，弃掉培养液，磷酸缓冲液清洗，用0.25％胰蛋白酶和0.01％乙二胺四乙酸再次消化，然后再次离心。

6.根据权利要求5所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，所述再次离心的速率为150g-200g，时间为5min。

7.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，在所述阳性转印母版的制备步骤中，用于磁化的细胞为悬浮细胞时，先将所述悬浮细胞离心，弃掉培养液，加入完全培养基，所述完全培养基含有所述磁性纳米颗粒。

8.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，所述磁场的预设强度为0.01T-1.0T。

9.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，在所述阳性转印母版的制备步骤中，细胞的筛选包括以下步骤：提供培养皿和磁性分选器，所述磁性分选器的磁场强度为预设强度；将培养皿置于磁性分选器的上方，并将与所述磁性纳米颗粒共培养的细胞加入培养皿的底部，摇晃后静置；倾斜磁性分选器并将培养皿中的培养液吸出，以在培养皿的底部得到磁化的细胞。

10.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，在所述阳性转印母版的制备步骤中，磁化的细胞与所述微磁体网膜结合之前，先将磁化的细胞用完全培养液重悬，再调至预设浓度。

11.根据权利要求1所述的细胞有序排列及转印方法，其特征在于，在所述阳性转印母版的制备步骤中，磁化的细胞与所述微磁体网膜结合的步骤包括：将微磁体网膜经消毒、磷酸缓冲液清洗、自然风干；再将风干后的微磁体网膜置于含有磁化细胞悬液的液体表面，使磁化的细胞附着在所述微磁体网膜的表面。