[发明专利]一种植物多倍体的诱导方法

权利要求书

1.一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、外植体花药的采集：在橡胶树的花序抽出和生长期中，雄花处于黄绿状态时，取雄花用镊子夹碎，使用核酸染料染色，在显微镜观察雄花的发育时期；

S2、愈伤组织诱导：以花粉粒单核居中期到靠边期的花药为外植体，接种于培养基A上培养30～40天，获得愈伤组织，所述培养基A包含以下含量组分：MS培养基、40～60mL/L椰子水、50～90g/蔗糖、1～3.2g/L植物凝胶、0.3～1.5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.5～1.8mg/L萘乙酸、0.3～1.5mg/L激动素KT、1～5ug/ml积雪草甙；

S3、体细胞胚诱导：将上述步骤S2中获得的愈伤组织接种于培养基B上，经脉冲光光源照射10～30s后置于培养箱中培养30～50天，获得体细胞胚；

所述培养箱的条件为：培养的24h内，保持氧浓度为3～8％，培养的第2～20天，保持氧浓度为10～20％，培养至第21～50天，保持与室内氧浓度相同；

所述培养基B包含以下含量组分：MS培养基、30～70mL/L椰子水、1～3.2g/L植物凝胶、50～90g/L蔗糖、1.0～3.5g/L活性炭、2～4mg/L激动素KT、0.5～2mg/L细胞分裂素6-BA、0.3～1.3mg/L赤霉素GA3、1～2mg/L脱落酸ABA、0.2～0.5ug/ml泊洛沙姆407；

S4、多倍体诱导：将上述步骤S3获得体细胞胚在液体培养基中浸渍48h，获得多倍体诱导后的体细胞胚；所述液体培养基包含以下含量组分：2～10mg/mL的秋水仙碱、MS培养基、30～70mL/L椰子水、50～70g/L蔗糖、0.5～1.5g/L植物凝胶、0.3～1.2g/L活性炭、0.1～0.8mg/L激动素KT、0.3～1.5mg/L赤霉素GA3、0.1～0.5mg/L吲哚乙酸IAA；

S5、再生植株诱导：将上述步骤S4获得的诱导后的体细胞胚接种于培养基D上培养30～50天，获得再生植株；

S6、倍性鉴定：取上述步骤S5中获得的再生植株的叶片，采用流式细胞仪进行倍性鉴定。

2.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S2的培养基A包含以下含量组分：MS培养基、50mL/L椰子水、70g/蔗糖、2.2g/L植物凝胶、1mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、1mg/L萘乙酸、0.8mg/L激动素KT、3ug/ml积雪草甙。

3.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S3的脉冲光为100纳米超窄带的脉冲光。

4.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S3的培养箱的条件为：培养的24h内，保持氧浓度为5％，培养的第2～20天，保持氧浓度为15％，培养至第21～50天，保持与室内氧浓度相同。

5.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S3的培养基B包含以下含量组分：MS培养基、50mL/L椰子水、2.2g/L植物凝胶、70g/L蔗糖、2.2g/L活性炭、3mg/L激动素KT、1mg/L细胞分裂素6-BA、1mg/L赤霉素GA3、1.5mg/L脱落酸ABA、0.4ug/ml泊洛沙姆407。

6.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S4液体培养基包含以下含量组分：5mg/mL的秋水仙碱、MS培养基、50mL/L椰子水、60g/L蔗糖、1.0g/L植物凝胶、1.0g/L活性炭、0.5mg/L激动素KT、1mg/L赤霉素GA3、0.2mg/L吲哚乙酸IAA。

7.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S2和S3在温度为20～30℃的黑暗条件下进行。

8.如权利要求1所述的一种植物多倍体的诱导方法，其特征在于：所述步骤S3和S4在温度为20～30℃，光照时间10～15h/d，光照强度为1200～2500lx的光照条件下进行。