[发明专利]一株海洋来源的弧菌噬菌体、微生态制剂及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一株海洋来源的弧菌噬菌体、微生态制剂及其制备方法与应用，该海洋来源的弧菌噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2020年8月6日，保藏编号为CCTCC NO：M2020397。该弧菌噬菌体具备感染并高效裂解致病弧菌的潜力，其裂解溶藻弧菌效率可达80％～90％，可利用该噬菌体制备生物微生态制剂应用于防控养殖水体致病弧菌等相关领域。

技术领域

本发明涉及一株弧菌噬菌体、微生态制剂及其制备方法与应用，尤其涉及一株海洋来源的弧菌噬菌体、微生态制剂及其制备方法与应用。

背景技术

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种革兰氏阴性短杆菌，其隶属于弧菌科(Vibrionaceae)，弧菌属(Vibrio)。溶藻弧菌广泛分布于海洋和河口水体环境中，是鱼虾贝类的条件致病菌，对我国海水养殖产业造成一定的影响；同时也是人类食物中毒，造成胃肠道感染的重要病原菌之一，危害人类健康。有效控制养殖环境中溶藻弧菌对我国海水养殖产业和国民健康具有重要的意义。

目前，国内有关溶藻弧菌疫苗的研究比较少，以及针对溶藻弧菌的灭活疫苗或亚单位疫苗很难同时兼顾高等哺乳动物和海洋生物，这也是制约疫苗应用的重要因素之一；抗生素是防控细菌感染的有效方法，然而此方法也不是防控溶藻弧菌的最优解决方案，有以下几种原因：1)抗生素对有机体的副作用及药物残留，2)滥用导致耐药性的产生，3)对环境的不利影响，4)针对溶藻弧菌抗生素的有效性欠佳等。近年来，国内外科研工作者也利用生物制剂来防控害菌类，特别是噬菌体(Bacteriophage)相关制剂。

噬菌体是以细菌为宿主的一类病毒，部分噬菌体(如烈性噬菌体)能够高效裂解杀灭宿主菌；该类噬菌体首先吸附到细菌表面，遗传物质进入细菌，利用宿主完成自身复制，装配病毒粒子，裂解细菌并释放到细菌外完成整个生命周期。噬菌体具有高度的宿主特异性，仅能感染某一种或某一类细菌，不能够感染(无)脊椎动物，因此噬菌体相关制剂具有高安全性。筛选高效裂解弧菌的噬菌体也成为防控致病弧菌的重要手段之一。国内也有弧菌噬菌体相关专利，例如：专利授权公告号CN106995803B名称为“一株用于防治对虾副溶血弧菌病的噬菌体及其扩培方法”；专利申请号CN201910596696.1名称为“副溶血性弧菌噬菌体vB_VpaP_MGD2、其用途和新型生物杀菌制剂”等等。然而弧菌噬菌体具有高度的宿主特异性，以上专利涉及的噬菌体仅能裂解特异的病原弧菌。

发明内容

发明目的：本发明的第一目的为提供一种高效裂解溶藻弧菌的海洋来源的弧菌噬菌体，本发明的第二目的为提供一种利用海洋来源的弧菌噬菌体制得的微生态制剂，本发明的第三目的为提供一种微生态制剂的制备方法，本发明的第四目的为提供一种弧菌噬菌体或微生态制剂在制备抑制溶藻弧菌的抑菌剂中的应用。

技术方案：本发明的一株海洋来源的弧菌噬菌体，弧菌噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2020年8月6日，保藏编号为CCTCC NO：M2020397。

该弧菌噬菌体保藏地址为中国武汉，武汉大学。该弧菌噬菌体的拉丁文名称为Vibrio alginolyticus bacteriophage。

本发明的利用海洋来源的弧菌噬菌体制得的微生态制剂。

本发明的微生态制剂的制备方法，包括如下步骤：在2-3％NaCl液体培养基中培养宿主菌；按1：500-1:1000接种噬菌体到液体培养基中，继续发酵培养；固液分离即可获得微生态制剂。

进一步地，培养宿主菌过程中转速为150-200rpm。

优选的，宿主菌在液体培养基中的培养时间为12-24h。

优选的，接种噬菌体后继续发酵培养12-48h。

本发明的弧菌噬菌体或微生态制剂在制备抑制溶藻弧菌的抑菌剂中的应用。