[发明专利]甘蔗SPSB基因同等型2的鉴定及应用

权利要求书

1.甘蔗SPSB基因同等型2，其特征在于，所述的甘蔗SPSB基因同等型2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的甘蔗SPSB基因同等型2，其特征在于，该基因的表达序列中含有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

3.检测权利要求1或2甘蔗SPSB基因同等型2的引物。

4.根据权利要求3所述的检测甘蔗SPSB基因同等型2的引物，其特征在于：针对SEQ IDNO.2所设计的引物。

5.含有权利要求3或4所述的检测甘蔗SPSB基因同等型2的引物的试剂盒。

6.一种鉴定权利要求1所述的甘蔗SPSB基因同等型2的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），提取待检测样本成熟期叶片的总RNA，然后反转录，得到cDNA；

步骤（2），以cDNA为模板，采用权利要求3或4所述的检测甘蔗SPSB基因同等型2的引物进行PCR扩增；

步骤（3），对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，之后测序检测，鉴定甘蔗SPSB基因同等型2。

7.根据权利要求6所述的鉴定甘蔗SPSB基因同等型2的方法，其特征在于，PCR扩增体系如下：10×Buffer 5μL；dNTP 2.5mM 5μL；KOD酶 1μL；上游引物10μmol 1.5μL；下游引物10μmol 1.5μL；MgSO₄ 2μL；模板10ng/μL 1.0μL；ddH₂O 33μL；总体积50μL；

PCR扩增程序为：94℃预变性2min；94℃变性15s，60℃退火30s，68℃延伸1.5min，共35个循环；68℃延伸5min。

8.根据权利要求6所述的鉴定甘蔗SPSB基因同等型2的方法，其特征在于：步骤（3）中，根据电泳检测的结果，当出现大小为2381bp片段，在SEQ ID NO.2序列上所设计的引物作为cDNA检测甘蔗SPSB基因同等型2的上游或下游引物。

9.权利要求1或2所述的甘蔗SPSB基因同等型2、权利要求6-8所述的鉴定甘蔗SPSB基因同等型2的方法在SPSB基因表达水平上的等位基因分型，SPSB基因同等型2的表达研究和分子辅助育种的标记制备中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，利用甘蔗YZ14-401 SPSB基因同等型2中SEQ ID NO.2所示的第5内含子的保留序列设计特异引物，进而进行SPSB基因表达水平上的等位基因分型，SPSB基因同等型2的表达研究和分子辅助育种的标记制备。