[发明专利]一种非诊断目的检测尿液中肌氨酸的方法

说明书

本发明提供了一种非诊断目的检测尿液中肌氨酸的方法，采用本发明的方法检测尿液中肌氨酸具有较高的准确度，并且特异性强，重现性好，前处理过程无须衍生和氮吹，操作简单，一般实验室均可完成，可以进行大批量样本处理和检测。

技术领域

本发明涉及尿液检测技术领域，特别涉及一种非诊断目的高效液相色谱串联质谱检测尿液中肌氨酸的方法。

背景技术

前列腺癌是威胁男性健康的常见肿瘤之一，病死率仅次于肺癌，中国的前列腺癌发病率呈明显上升趋势，大部分患者以尿路症状或骨痛就诊，血清前列腺特异性抗原(prostate antigen,PSA)检测在临床上广泛应用于前列腺癌的早期筛查和诊断。临床上需要对PSA异常患者进行穿刺活检去的组织病理学诊断后方可确诊。PSA是前列腺特异性抗原非前列腺癌特异性抗原，诊断结果存在灰区。PSA在诊断前列腺癌灰区的含量为4-10ng/mL,在此区间不能准去的区分前列腺癌增生、前列腺炎和早期前列腺癌。在中国，PSA含量4-10ng/mL范围内穿刺活检前列腺癌阳性率不足20％，且确诊需活检数次，对于患者来说这一过程非常痛苦。此外，活检穿刺可能会增加肿瘤转移风险增加感染等并发症的发生。

肌氨酸是一种存在于人体肌肉和其他组织的天然氨基酸，为甘氨酸的代谢产物，前列腺癌患者的尿液中肌氨酸水平显著高于健康人群，可作为前列腺癌的新型、简便、无创的生物标志物，临床检测数值可用于评判患者前列腺癌患癌的可能性，且对早期前列腺癌的诊断准确性优于PSA。肌氨酸加成呢仅需采集患者清晨中段尿液，增加前列腺癌的检测准确率，减少血样采集及活检穿刺给患者带来的痛苦。

基于我国初诊前列腺癌分期偏晚，早期前列腺癌具有隐匿性的特点，且早期前列腺癌存在有效的治疗措施，以及国内外研究和文献报道的支持，在我国开展前列腺癌的检查具有重大的意义，可提高前列腺的治疗效果，改善预后等。

目前衍生化高效液相色谱法在临床肌氨酸的检测中应用较多，但存在操作繁琐、影响因素多、分析时间长等缺点，给实际工作带来了诸多不便。本专利采用液相色谱-质谱联用法对尿液中的肌氨酸进行检测，前处理无需衍生，省时省力的同时提高了检测结果的敏感性。

发明内容

本发明的目的是解决现有肌氨酸检测方法的缺陷，提供了一种非诊断目的非衍生化方法检测尿液中肌氨酸的方法。

一种非诊断目的检测尿液中肌氨酸的方法，包括如下步骤：(1)使用A1试剂和A2试剂对尿液样品中的肌氨酸进行释放；(2)使用液相色谱法对释放后的肌氨酸进行进一步分离；(3)使用质谱法分析释放的肌氨酸，从而对肌氨酸进行定性和/或定量检测。

色谱条件包括：色谱柱为C18柱，流动相A为甲酸水，流动相B为甲酸甲醇，梯度洗脱。

进一步地，色谱柱为Phenomenex Kinetex-C18，50×2.1mm，1.7μm；流动相A为0.1％的甲酸水，流动相B为0.1％的甲酸甲醇。

进一步地，色谱条件还包括：流速为0.3mL/min，柱温为40℃，进样体积为2μL。

进一步地，梯度洗脱程序见下表：