[发明专利]一种基于原子力显微术的肿瘤外泌体诱导细胞恶变过程的检测方法

权利要求书

1.一种基于原子力显微术的肿瘤来源外泌体诱导细胞恶变过程的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用接种液培养肿瘤细胞至铺满培养皿底，取肿瘤细胞上清液，通过高速离心机进行梯度离心，用0.22μm孔径的滤器过滤梯度离心后的上清液，再将过滤后的上清液加入到超滤管中进行离心，最后加入磷酸盐缓冲液再次离心得到肿瘤来源外泌体；

(2)利用扫描电镜对步骤(1)获取的肿瘤来源外泌体进行粒径大小分析，通过蛋白免疫印记法对相关蛋白生物标志物CD9,CD63和CD81进行验证；

(3)利用MTT法筛选肿瘤来源外泌体浓度，将1500μg/mL浓度的肿瘤来源外泌体与正常细胞共培养，检测细胞的增殖和迁移能力；

(4)利用原子力显微术在液态环境下对良性细胞转化的恶性细胞进行多维信息检测。

2.根据权利要求1所述的一种基于原子力显微术的肿瘤来源外泌体诱导细胞恶变过程的检测方法，其特征在于，接种液为含有体积分数为10％的无外泌体胎牛血清的DMEM液体培养基。

3.根据权利要求1所述的一种基于原子力显微术的肿瘤来源外泌体诱导细胞恶变过程的检测方法，将铺满培养皿底的肿瘤细胞取上清液进行梯度离心，其特征在于，包括以下步骤：

步骤I,取肿瘤细胞上清液至离心管，放入高速离心机中，离心参数设定为温度4℃，转速2,000×g，时间10min；

步骤II,取步骤I离心后的上清液至新的离心管，放入高速离心机中，离心参数设定为温度4℃，转速10,000×g，时间30min。

4.根据权利要求1所述的一种基于原子力显微术的肿瘤来源外泌体诱导细胞恶变过程的检测方法，其特征在于，将经滤器过滤后的上清液加入到超滤管中进行离心，然后向超滤管中加入磷酸盐缓冲液再次离心得到肿瘤来源外泌体，离心参数均为温度4℃，转速4,000×g，时间30min。

5.根据权利要求1所述的一种基于原子力显微术的肿瘤来源外泌体诱导细胞恶变过程的检测方法，其特征在于，多维信息包括细胞形貌、力学特性和电学特性。