[发明专利]一种包覆细胞膜的还原响应型碳点载药纳米团簇及其制备和应用

权利要求书

1.一种包覆细胞膜的还原响应型碳点载药纳米团簇，其特征在于，所述载药纳米团簇是将荧光碳点通过交联剂交联形成碳点纳米团簇，然后负载阿霉素，并进一步包覆黑色素瘤细胞膜得到，所述交联剂为胱胺二盐酸盐Cystamine；

所述包覆细胞膜的还原响应型碳点载药纳米团簇的制备方法，包括：

(1)将4-氨基水杨酸溶于超纯水中形成悬浊液，然后水热反应，冷却，离心、过滤，冷冻干燥，得到荧光碳点y-CDs，其中4-氨基水杨酸与超纯水的比例为0.2g:8-15mL；

(2)将步骤(1)中y-CDs溶于超纯水中，加入EDC和NHS活化，然后加入交联剂，搅拌反应，透析，得到还原响应型碳点纳米团簇y-CDs NCs溶液，其中交联剂与y-CDs的质量比为1-1.2：1-1.2；

(3)将盐酸阿霉素DOX·HCl溶于溶剂中，加入三乙胺，再加入到步骤(2)中y-CDs NCs溶液中，避光敞口搅拌，离心，冷冻干燥，得到负载阿霉素的碳点纳米团簇y-CDs NCs/DOX，其中DOX·HCl、y-CDs NCs、三乙胺和溶剂的比例为1-1.2mg：1-1.2mg：2-2.5μL：100-125μL；

(4)将细胞裂解液加入到B16细胞沉淀中，反复冻融破碎，梯度离心提取B16细胞膜，重悬于PBS溶液中得到B16细胞膜悬液；

(5)将步骤(3)中y-CDs NCs/DOX与步骤(4)中B16细胞膜悬液混合，反复挤压，离心，得到包覆细胞膜的还原响应型碳点载药纳米团簇y-CDs NCs/DOX@CCM，其中y-CDs NCs/DOX与细胞膜悬液的比例为200μg：0.4-0.6mL。

2.一种包覆细胞膜的还原响应型碳点载药纳米团簇的制备方法，包括：

(1)将4-氨基水杨酸溶于超纯水中形成悬浊液，然后水热反应，冷却，离心、过滤，冷冻干燥，得到荧光碳点y-CDs，其中4-氨基水杨酸与超纯水的比例为0.2g:8-15mL；

(2)将步骤(1)中y-CDs溶于超纯水中，加入EDC和NHS活化，然后加入交联剂，搅拌反应，透析，得到还原响应型碳点纳米团簇y-CDs NCs溶液，其中交联剂与y-CDs的质量比为1-1.2：1-1.2，交联剂为胱胺二盐酸盐Cystamine；

(3)将盐酸阿霉素DOX·HCl溶于溶剂中，加入三乙胺，再加入到步骤(2)中y-CDs NCs溶液中，避光敞口搅拌，离心，冷冻干燥，得到负载阿霉素的碳点纳米团簇y-CDs NCs/DOX，其中DOX·HCl、y-CDs NCs、三乙胺和溶剂的比例为1-1.2mg：1-1.2mg：2-2.5μL：100-125μL；

(4)将细胞裂解液加入到B16细胞沉淀中，反复冻融破碎，梯度离心提取B16细胞膜，重悬于PBS溶液中得到B16细胞膜悬液；

(5)将步骤(3)中y-CDs NCs/DOX与步骤(4)中B16细胞膜悬液混合，反复挤压，离心，得到包覆细胞膜的还原响应型碳点载药纳米团簇y-CDs NCs/DOX@CCM，其中y-CDs NCs/DOX与细胞膜悬液的比例为200μg：0.4-0.6mL。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤(1)中水热反应温度为170-190℃，水热反应时间为2-4h。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤(2)中y-CDs、EDC、NHS和交联剂的质量比为1-1.2:5.5-6.5:3-4:1-1.2；搅拌反应温度为室温，搅拌反应时间为2-4天。

5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤(3)中溶剂为甲醇；搅拌温度为室温，搅拌时间为过夜。

6.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤(4)中B16细胞与细胞裂解液的比例为1×10⁷个：2-4mL；细胞裂解液含1％苯甲基磺酰氯PMSF。