[发明专利]一种人源沉默信息调节因子4的活性荧光检测方法

说明书

本发明公开了一种人源沉默信息调节因子4的活性荧光检测方法，该方法以含有配对的荧光基团与荧光淬灭基团、且含有3‑羟基‑3‑甲基戊二酰化赖氨酸残基的多肽为底物，1)将所述底物与人源沉默信息调节因子4孵育，脱去底物的赖氨酸残基上的3‑羟基‑3‑甲基戊二酰化修饰，得到无修饰的赖氨酸多肽；2)将所述的无修饰的赖氨酸多肽与蛋白水解酶裂解液孵育，从赖氨酸的C端裂解肽键；使荧光强度与上述的无修饰的赖氨酸多肽关联起来，该检测得到荧光强度与人源沉默信息调节因子4的酶活性具有相关性。这样的方法可应用于Sirtuin4调节剂的筛选，或是生物样本中的Sirtuin4活性检测，具有微型化、自动化、快速可靠等特点。

技术领域

本发明涉及药学领域，尤其是一种人源沉默信息调节因子4(Sirtuin4或SIRT4)的活性荧光检测方法。

背景技术

人源沉默信息调节因子(Sirtuins)是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖性的脱酰基酶，在调节衰老、转录、代谢等许多生物学过程中起着至关重要的作用，因此与癌症、神经退行性变、糖尿病、肥胖症等人类疾病有关(Annu.Rev.Biochem.2004,73,417-435；Annu.Rev.Biochem.2015,85,405-429)。哺乳动物中有七种sirtuin，分别称为SIRT1-SIRT7。它们的细胞器和功能不同。人源沉默信息调节因子4(Sirtuin4或SIRT4)是三种线粒体sirtuin蛋白之一，SIRT5和SIRT6是另外两种(Biochem.Biophys.Res.Commun.2000,273,793-798)。由于线粒体功能在代谢中的关键作用，SIRT4通过调节线粒体中的代谢过程，参与了多种人类疾病的发生和发病机制，主要包括糖尿病、癌症、衰老等(FrontPhysiol.2019,10,1006)。例如，SIRT4可以减少由氨基酸或葡萄糖刺激的胰腺β细胞的胰岛素分泌，并通过SIRT4基因敲除小鼠帮助高胰岛素血症、葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗进一步证明了SIRT4在II型糖尿病中的关键作用(Cell 2006,126,837-839；CellMetab.2017,25,838-855；Cell 2006,126,941-954；J.Biol.Chem.2007,282,33583-33592；Exp.Ther.Med.2017,13,342-348；Aging 2013,5,835-849；Eur.J.Histochem.2011,55,55-59；Best Pract.Res.Clin.Endocrinol.Metab.2012,26,759-770)。此外，不同细胞或器官中的SIRT4与衰老高度相关(Eur.HeartJ.2017,38,1389-1398；Aging 2016,8,484-505；Front.Genet.2015,6,1-9；Exp.Dermatol.2012,21,231-233)。SIRT4在老化或紫外线照射过程中上调，这与皮肤老化相关表型有关(Front.Genet.2015,6,1-9；Exp.Dermatol.2012,21,231-233)。另一方面，SIRT4被认为是一种肿瘤抑制因子。在许多人类癌症中，SIRT4的表达被发现下调，而SIRT4还可以抑制GDH的活性，从而减少谷氨酰胺分解和糖酵解作用(Br.J.Cancer 2015,113,492-499；J.Biol.Chem.2014,289,4135-4144；Cancer Cell2013,23,450-463)。