[发明专利]一种用于微核和染色体试验的制片方法

说明书

本发明提供了一种用于微核和染色体试验的制片方法，包括如下步骤：细胞培养后吸弃上清液低渗处理1‑30min，添加固定液预固定1‑5min；离心后添加所述固定液6‑12ml固定20‑40min，然后再‑离心、滴片。本发明的制片方法只固定一次，减少了离心和人为操作次数。新方法在固定步骤完离心后，上清液直接倾倒掉也节约了时间。总之，新方法节省时间、节省人力物力，降低了试验成本，试验也更简单易行，试验质量也更容易控制，试验结果也更加可靠。

技术领域

本发明涉及生物学和医学领域，具体而言，涉及一种用于微核和染色体试验的制片方法。

背景技术

微核试验和染色体试验在环境卫生、职业卫生和遗传毒性损伤研究等公共卫生领域和生物检测及临床医学诊断中均有着广泛的应用，如染色体损伤检测、癌症风险评估和射线暴露生物剂量评估等等。微核是染色体断片或分裂滞后的整条染色体，有微核意味着染色体断裂或畸变。无论微核试验还是染色体试验，在制片过程中都要经过多次离心、多次固定，试验操作过程较繁琐复杂、费时费力、质量也不易控制。尤其在样本多、试验操作人员少的情况下，工作量大更显得紧张，试验结果也难以保证。工作效率、工作进度降低，常延误出报告时间。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于微核和染色体试验的制片方法，该制片方法在整个方法实施过程中只需固定一次，减少了离心和人为操作次数。并且采用了该新方法后，固定步骤完成离心后，上清液直接倾倒掉也节约了时间。总之，本发明的制片方法节省了时间、节省了人力物力，降低了试验成本，试验也更简单易行，试验质量也更容易控制，试验结果也更加可靠。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明提供了一种用于微核和染色体试验的制片方法，包括如下步骤：

细胞培养后吸弃上清液低渗处理1-30min，添加固定液预固定1-5min；

离心后添加所述固定液6-12ml固定20-40min，然后再离心、滴片。

本发明的制片方法是经过长期的实践摸索得到的，传统的制片方法是将细胞培养结束后先将培养物混匀、离心，离心完成后吸弃上清液，然后在沉淀中加入低渗氯化钾溶液。本发明的方法则在细胞培养结束后直接吸弃上清液，并在沉淀中直接加入低渗氯化钾溶液。因为培养物在培养箱中一般都属于静置培养，既然细胞在静置培养过程中已经在重力作用下自然沉降，取出培养物后就没有必要再多此一举重新离心了。因为重新混匀、离心既浪费时间还会损伤细胞、降低细胞回收率，也不利于试验质量控制。也就是说通过采用本发明的操作方法减少了一次吹打、离心过程，等于避免了一次对细胞的损伤过程，在减少工作量的同时也使试验得到优化、质量得到保证，结果也更为可靠。

因此本发明的制片方法相当于对微核试验和染色体试验的试验方法特别是对制片过程进行了优化、简化，相较于现有技术的操作方法节约了操作时间，也降低了人力成本。

此外，传统方法中，固定次数多虽然可以减少杂质，但也容易丢失细胞。样本量大、血样达到几百个时，由于操作先后时间差别太大很难保证试验的均一性和质量，离心次数多反而不利于试验，还增加试验人员的劳动量。本发明的方法中，固定次数减少可能会影响固定效果和细胞碎片等杂质的清除。但是通过实践发现，固定效果主要与固定时间有关，本发明的方法虽然减少固定次数但不减少固定所需要的时间，因此并不会影响到最终的固定效果。

本发明在进行预固定时，是为了先对细胞发生一定程度的固定，适当增加固定液用量可以减少细胞碎片，将预固定离心后的上清液吸取干净并适当增加固定液的用量，也可以减少细胞碎片；这都可以弥补因固定次数减少而带来的杂质问题。