[发明专利]一种基于幼芽的流苏树染色体核型分析方法

说明书

本发明公开了一种基于幼芽的流苏树染色体核型分析方法，包括以下步骤：(1)取流苏树植株的幼芽作为试验材料，放入由对二氯苯和8‑羟基喹啉组成的混合处理液中，在避光条件下进行预处理；(2)将预处理后的试验材料放入卡诺固定液中，固定10‑24h；(3)将固定后的试验材料用蒸馏水冲洗后，转移至0.075mol/L KCl溶液中进行前低渗处理；将前低渗处理后的试验材料进行解离处理；(4)将解离后的材料用蒸馏水冲洗后，采用染色液进行染色；(5)对染色后的材料进行压片和镜检。利用本发明的方法对通过“本砧嫁接”保存的优良种质的流苏树染色体核型进行分析，结果准确可靠，方法简便，易于操作，对于流苏树种质资源的收集、分类、评价和保护具有重要意义。

技术领域

本发明涉及林木细胞学分析方法技术领域，具体涉及一种基于幼芽的流苏树染色体核型分析方法。

背景技术

植物染色体是遗传信息的重要载体。核型是依据处于细胞分裂中期浓缩的染色体的形态来建立的。不同的物种具有不同的核型，所以核型是区别物种的基本遗传学依据。核型分析能够有效的对各个染色体的特征进行识别，这对于促进基因定位以及定体方面的研究发挥着其他领域不可替代的作用。在染色体工程、细胞分类学以及植物杂交育种领域，也是一种基础的、不可或缺的方法。自1848年Hofmeister在观察紫鸭趾草的花粉母细胞时发现了染色体，1888年Waldeyer正式提出染色体这一术语，染色体的研究至今已有一百多年的历史。染色体核型又称为染色体组型，是对每种生物染色体的数目、长度、形态、带型以及着丝粒位置等方面的分析研究，它代表了一个个体，一个种甚至一个属或更大类型的特征，对于研究生物遗传变异、生物系统的演化、物种之间的亲缘关系、某些生物的起源、远源杂交等有重要意义。常规的染色体核型分析是以植物材料的根尖为试材，用压片法对其染色体进行观察分析。

流苏树是木犀科流苏树属植物，为我国家二级保护植物。流苏根系发达，适应性强，耐寒，喜中性及微酸性土壤，耐干旱瘠薄，可作荒山绿化树种。成年流苏树形、花型优美，是优良的园林绿化树种及行道树，在生产实践上具有良好的开发利用价值。

目前对于流苏树的研究主要集中在流苏树的组织快繁、扦插、嫁接等方面；近年来在流苏树分子生物学遗传多样性上的研究取得了一些进展(流苏种质资源的收集评价及遗传多样性的分析，山东农业大学)，但有关流苏树细胞遗传学上的研究至今仍旧空白。

染色体核型分析主要通过研究其染色体数目及形态特征，反映不同物种或品种之间存在的染色体细胞学差异。不同物种的染色体核型模式在进化的过程中不受外界环境因素干扰和影响，在一定程度上反映出其进化的基本特征。因此，植物核型的研究不仅能为种间遗传变异、系统演化以及亲缘关系提供证据，还可以为杂交育种选育及杂交后代鉴定等提供理论依据。但由于流苏树的染色体数目较多，且染色体非常小，一般较难观察，所以国内外对于流苏树染色体数目、核型分析的研究的相关报道极少，对于流苏树的染色体核型分析仍然是目前的技术难点所在。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种基于幼芽的流苏树染色体核型分析方法。本发明采用流苏树的幼芽作为试验材料对流苏树嫁接的不同种质进行核型分析，克服了常规核型分析技术在流苏树嫁接繁育的不同种质方面的局限性。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种基于幼芽的流苏树染色体核型分析方法，包括以下步骤：

(1)取流苏树植株的幼芽作为试验材料，放入由对二氯苯和8-羟基喹啉组成的混合处理液中，在避光条件下进行预处理；

(2)将预处理后的试验材料用蒸馏水冲洗后放入卡诺固定液中，固定10～24h；

(3)将固定后的试验材料用蒸馏水冲洗后，转移至0.075mol/L KCl溶液中进行前低渗处理；将前低渗处理后的试验材料用蒸馏水冲洗后放入1mol/L HCl中，60℃水浴解离13～15min；