[发明专利]一种测定抗生素残留的方法

说明书

本发明专利涉及抗生素检测的技术领域，公开了一种测定抗生素残留的方法，通过在样品前处理中加热高压脉冲电场，以及对破碎步骤的设计，在检测时，土霉素、四环素、金霉素峰形良好，10min内得到了较好地分离；线性关系较好，相关系数均在0.9992以上；三种不同加标浓度的土霉素、四环素、金霉素RSD在5％以下，重现性较好；加标回收率均大于85％；土霉素检测限为3.3×10^‑3μg/ml，四环素检测限为3.8×10^‑3μg/ml，金霉素检测限为4.6×10^‑3μg/ml，检测限较低；因此本方法可满足土霉素、四环素、金霉素的同时、快速、准确、大批量检测。

技术领域

本发明专利涉及抗生素检测的技术领域，具体而言，涉及一种测定抗生素残留的方法。

背景技术

四环素类抗生素(Tetracyclines，TCs)是一类广谱抗菌药物，主要有四环素(TC)、金霉素(Chlortetracycline，CTC)、土霉素(Oxytetracycline，OTC)等，由于抗菌谱较广、价格低廉被广泛应用于禽畜养殖。若居民长期食用或一次性大量食用含有TCs抗生素的动物性食品，会引起菌群失调、胃肠道反应，导致肝脏损害以及影响牙齿和骨骼的发育。

目前，四环素类抗生素残留量的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、薄层色谱法、毛细管电泳法、电化学法、高效液相色谱法等。目前采用较多的高效液相色谱法，存在着土霉素与金霉素较难分离、检测限较高等问题。GB/T 21317-2007采用了液质联用检测方法，仪器昂贵，难以在常规和基层实验室开展。本研究通过对样品前处理方法和色谱条件的研究和探讨，建立一种快速、灵敏、准确度高、分离效果好、能同时测定OTC、TC、CTC残留且适合大批量样品检测的高效液相色谱-紫外检测法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速、灵敏、准确度高、分离效果好、能同时测定OTC、TC、CTC残留且适合大批量样品检测的测定动物性食品中三种四环素类抗生素残留的方法，旨在解决现有技术中存在的土霉素与金霉素较难分离、检测限较高的问题。

本发明是这样实现的：

一种测定抗生素残留的方法，该测定方法包括以下步骤：

(1)样品的预处理：

(101)将样品粉碎搅拌后，通过匀质机匀质后，再经5％高氯酸沉淀蛋白，超声提取，离心后提取上清液再通过氮气吹干浓缩；

(102)将提取的上清液中加入金属离子获得离子液体，对离子液体施加高压脉冲电场，高压脉冲电场对离子液体中金属离子和四环素类抗生素分子进行极化作用，实现金属离子和四环素类抗生素分子的络合离子液体；

(103)在络合离子液体加入EDTA-McIlvaine缓冲溶液中进行萃取，以消除金属离子的干扰，提取液经离心、浓缩后，加乙腈-水溶解残渣，制得待测液；

(2)样品的测定：采用高效液相色谱-紫外检测法检测，流动相采用乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钠，将待测液流动相溶解并定容至2ml，过0.45μm滤膜，采用梯度洗脱，洗脱的梯度如表1所示，流速1.2ml/min，取待测液20μl上机检测，检测波长273nm，保留时间定性，峰面积定量，再根据绘制的标准曲线，测定出三种四环素类抗生素的残留量。

表1流动相梯度洗脱程序

进一步地，在步骤(101)中，样品粉碎搅拌的方法为：将动物性食品加热到60℃，维持5分钟，再放入液氮桶中，通过液氮冷冻干燥6-12h，冷冻温度低于-30℃，然后通过粉碎机粉碎至粒径0.3mm以下，取1g的粉碎物加入到10ml的pH值为4.5的乙腈中混匀。

进一步地，在步骤(102)中，所述的高压脉冲电场处理条件为场强20～30kv/cm，脉冲数为6～10，时间5～10min。