[发明专利]一种对阿糖胞苷耐药的稳转重组B淋巴细胞白血病细胞系的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种对阿糖胞苷耐药的稳转重组B淋巴细胞白血病细胞系的构建方法及其应用。实验证明，利用RNA干扰技术抑制白血病细胞中肿瘤抑制因子BACH2的表达，可抑制B‑ALL细胞发生凋亡，并降低白血病细胞对化疗药物的敏感性，增加白血病细胞对阿糖胞苷的耐药性。本发明为白血病研究提供了一个对阿糖胞苷耐药的稳转重组B淋巴细胞白血病细胞系，该细胞系的建立有望为白血病耐药研究提供一个细胞系模型，在医学研究领域具有十分广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种对阿糖胞苷耐药的稳转重组B淋巴细胞白血病细胞系的构建方法及其应用。

背景技术

BTB与CNC同源蛋白2(BTB and CNC homology 2，BACH2)是B细胞特异性转录因子，由BACH2基因编码，在B细胞定向发育过程中发挥关键作用。在淋巴祖细胞阶段，BACH2抑制髓系发育程序，推动祖细胞向B细胞分化。在前B细胞阶段，BACH2与BCL6竞争性调控基因的启动子区，对B细胞进行阴性选择。在随后的B细胞成熟阶段，BACH2与BCL6进一步协作阻止B细胞向浆细胞分化，并调节人类体细胞高度突变和类别转换重组。近年研究表明，BACH2尚参与T细胞介导的免疫反应及T细胞静息状态的维持。由此可见，BACH2在淋巴细胞发育及分化过程中发挥重要的调节作用。

白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病。由于分化障碍、增殖失控、凋亡受阻等机制，恶性细胞在骨髓及其他造血组织中大量增殖，引起骨髓微环境改变，从而引发严重的临床症状及并发症。其中，急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是儿童时期最常见的恶性肿瘤和主要死亡原因之一。随着联合化疗及支持疗法的应用，儿童ALL的治愈率在我国已达80％以上。尽管如此，白血病耐药和复发使得儿童ALL治疗进入瓶颈期，总体治愈率无明显提高。其中，最主要的原因之一是白血病发病与复发耐药机制不明。目前，儿童白血病的耐药与复发率高达15％-20％左右，已成为影响白血病患儿康复的最关键因素，不仅给患儿本身、而且给家庭及社会带来了不可弥补的严重伤害和不和谐因素。

在儿童白血病化疗方案中，阿糖胞苷(cytarabine，Ara-C)是一种作用于细胞S增殖期的嘧啶类抗代谢药物，通过抑制细胞DNA合成干扰细胞增殖。阿糖胞苷主要用于急性白血病，对急性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病及急性单核细胞白血病均有疗效，并在这些疾病的治疗方案中属于诱导化疗的核心药物。尽管如此，长时间、大剂量应用阿糖胞苷容易使患儿出现耐药反应；此外，高危亚型的白血病患儿由于肿瘤恶性程度高，极易发生耐药反应与疾病复发，严重影响了白血病化疗方案的疗效与疾病转归。

发明内容

本发明首先提供了抑制BACH2蛋白活性的物质或降低BACH2蛋白含量的物质或沉默或敲除或突变BACH2基因的物质或抑制BACH2基因表达的物质的新用途。

本发明提供了抑制BACH2蛋白活性的物质或降低BACH2蛋白含量的物质或沉默或敲除或突变BACH2基因的物质或抑制BACH2基因表达的物质在如下a1)-a3)中任一种中的应用：

a1)制备抑制白血病细胞凋亡的产品；

a2)制备降低白血病细胞对化疗药物的敏感性的产品；

a3)制备增加白血病细胞对化疗药物的耐药性的产品。

本发明又提供了一种产品，其活性成分为抑制BACH2蛋白活性的物质或降低BACH2蛋白含量的物质或沉默或敲除或突变BACH2基因的物质或抑制BACH2基因表达的物质；所述产品的功能为如下b1)-b3)中任一种：

b1)抑制白血病细胞凋亡；

b2)降低白血病细胞对化疗药物的敏感性；

b3)增加白血病细胞对化疗药物的耐药性。