[发明专利]一种用于从江香猪肠段组织总RNA的提取方法

说明书

本发明涉及一种用于从江香猪肠段组织总RNA的提取方法，该方法具体为将组织段粉末于TRIzolRNA裂解液中，经过震荡器剧烈震荡、静置，再用高速离心；取上清液至灭菌好的离心管中，加入氯仿，振摇混匀，待溶液呈浑浊状后置于冰上静置，再离心，弃去离心管中液体；再向离心管中加入75％乙醇溶液洗涤白色沉淀，使沉淀在管中悬浮，再将离心管放入高速冷冻离心机中离心，弃去离心管内的乙醇；将含有白色沉淀的离心管倒扣在面巾纸上，晾干乙醇溶液，即得总RNA。该方法简便易行，成本低，收率高，无需纯化也能获得纯度高、稳定性好的总RNA产品，为指导分子生物学研究应用及其他动物组织总RNA提取提供较高的研究价值。

技术领域

本发明涉及生命科学技术和自然科学技术领域，尤其是一种用于从江香猪肠段组织总RNA的提取方法。

背景技术

核酸提取是分子生物学试验的基础，高质量的核酸是进行分子标记、基因克隆及基因表达研究等下游技术的必要前提。随着现代分子生物学技术的飞速发展，对于RNA的研究已成为目前的研究热点之一。为了获得高质量的总RNA，目前，虽然市场上有众多的总RNA提取试剂(试剂盒)，但是在实际操作过程中，由于受到实验操作环境、实验室条件和实验操作手法等诸多因素的影响，往往很难获得稳定性好、纯度高的总RNA，因此，寻找一种高效、经济、简便、稳定性好、纯度高的总RNA提取方法显得尤为必要。

申请号CN200710093163.9，动物关节软骨组织总RNA提取方法，其特征在于该方法有以下步骤：(1)取动物关节软骨组织，研磨，加入变性液，β-巯基乙醇，匀浆；(2)冰水浴下，加酸性水饱和酚，摇匀，加醋酸钠，氯仿、异戊醇混合液，冰水浴上15min；(3)4℃下，离心，取上清液，加氯仿、异戊醇混合液，离心取上清，加异丙醇，-20℃下沉淀，离心，得到凝胶状RNA和蛋白多糖混合沉淀，加无RNA酶水，溶解得胶状溶液；(4)取胶状溶液用plant RNAout试剂盒的RNA提取步骤得到总RNA沉淀，取沉淀，乙醇洗涤后用无RNA酶水溶解沉淀，即得关节软骨组织总RNA溶液。

申请号CN200710093163.9，操作步骤复杂，plant RNAout试剂盒提取的总RNA稳定性不好，纯度低，成本高。

申请号CN201711496653.3，一种用于动物组织总RNA提取的方法，其特征在于提供一种用于动物(畜禽)组织总RNA提取的方法，其特征在于样品的处理步骤包括：样品加入已装有1mL Trizol试剂的离心管中，在2000-2800r/min振荡混匀，冰上放置5-10min；加入0.22mL氯仿，漩涡振荡15s或上下颠倒摇晃1min，冰上放置3min，在4℃离心机12000×g离心15min；离心完成的溶液分为三层，上层为水相层，中间为白色杂质层，下层为粉红色有机层；悬空吸取上层水相层转移至干净的离心管中，分别加入600μL异丙醇、600μL氯化钠和柠檬酸钠混合液，轻柔上下颠倒混匀，冰上放置10min或-20℃放置20min；12000×g 4℃离心10min，弃上清；加入1.2mL质量百分比为75％乙醇洗涤沉淀，轻柔上下颠倒，使白色沉淀悬浮；12000×g 4℃离心3min，弃上清；重复采用1.2mL质量百分比为75％乙醇洗涤沉淀，轻柔上下颠倒，使白色沉淀悬浮，置于冰上静置5min，7500×g 4℃离心5min，弃上清；7500×g 4℃离心30s，用移液枪头吸掉多余液体，室温干燥3-5min。

申请号CN201711496653.3，操作步骤复杂，提取中加入的异丙醇、氯化钠和柠檬酸钠混合液性质不稳定，混合液各成分量难以控制，容易造成提取过程中高盐的形成和醇沉不完全现象，影响提取动物组织总RNA产品纯度、稳定性及收率。