[发明专利]一种干细胞向软骨细胞分化的诱导方法在审
| 申请号： | 202010870869.7 | 申请日： | 2020-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN111961643A | 公开（公告）日： | 2020-11-20 |
| 发明（设计）人： | 路尧;王详;钱明 | 申请（专利权）人： | 杭州优渡生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 杭州橙知果专利代理事务所(特殊普通合伙) 33261 | 代理人： | 李品 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 干细胞 软骨 细胞 分化 诱导 方法 | ||
1.一种干细胞向软骨细胞分化的诱导方法，其特征在于，包括提供一种细胞培养基，所述细胞培养基中含有miRNA和转化生长因子，使用所述培养基培养所述干细胞使所述干细胞成软骨细胞分化趋势相较于常规培养基在相同培养条件下有显著提升。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述miRNA包含于特制载体中，所述特制载体的制备方法包括：用多聚甲醛和二硫化物还原剂二硫苏糖醇封闭巯基以促进细胞产生细胞外囊泡，用18mM多聚甲醛和1mM DTT处理EL4细胞，共孵育45分钟，将上述共孵育产物离心并收集空载体，去上清后，用添加了多聚甲醛和DTT的磷酸盐缓冲盐水清洗，获得富含特制载体的上清液。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述细胞培养基含有转铁蛋白、转化生长因子FGF9、地塞米松、烟酸肌醇酯、装载有miRNA的载体、DMEM培养基和胎牛血清。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞培养基含终浓度为3.5mg/L转铁蛋白、5μg/L转化生长因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L烟酸肌醇酯、0.48mg/L装载有hsa-miR-214的载体、DMEM培养基和体积分数为8.5％的胎牛血清。
5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞培养基含终浓度为3.5mg/L转铁蛋白、5μg/L转化生长因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L烟酸肌醇酯、0.48mg/L装载有has-miR-UL112-3p的载体、DMEM培养基和体积分数为8.5％的胎牛血清。
6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞培养基含终浓度为3.5mg/L转铁蛋白、5μg/L转化生长因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L烟酸肌醇酯、0.48mg/L装载有hsa-miR-168a的载体、DMEM培养基和体积分数为8.5％的胎牛血清。
7.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞培养基含终浓度为3.5mg/L转铁蛋白、5μg/L转化生长因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L烟酸肌醇酯、0.48mg/L装载有hsa-miR-156a的载体、DMEM培养基和体积分数为8.5％的胎牛血清。
8.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述细胞培养基含终浓度为3.5mg/L转铁蛋白、5μg/L转化生长因子FGF9、0.15μmol/L地塞米松、2.0mg/L烟酸肌醇酯、0.48mg/L装载有miR-1260b的载体、DMEM培养基和体积分数为8.5％的胎牛血清。
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