[发明专利]一种脂肪组织干细胞的提取方法

说明书

本发明公开了一种脂肪组织干细胞的提取方法，采用多连袋式脂肪组织干细胞提取装置进行提取，按如下步骤进行：(A1)第一清洗袋内预先加有30mL脂肪组织活性剂；(A2)脂肪组织加入到第一清洗袋，使得脂肪组织与脂肪组织活性剂混合均匀；(A3)对第一清洗袋进行离心；(A4)对第三清洗袋进行离心；(A5)转移至消化袋内；(A6)‑(A8)在消化袋内进行消化、离心处理。本发明提供的脂肪组织干细胞提取方法为脂肪组织的运输、清洗和消化提供了一个相对封闭的无菌内环境，减少了与外界接触的机会，降低了脂肪组织污染的概率，保证了实验的安全性，且进一步提高脂肪清洗和消化效率。

技术领域

本发明涉及脂肪干细胞领域，特别是一种脂肪组织干细胞的提取方法。

背景技术

脂肪组织在人体内储量丰富，通过抽脂从中获得的大量脂肪干细胞(ADSCs)有自我更新增殖及多向分化潜能，可向脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞、成骨细胞、神经细胞、神经胶质细胞及胰岛细胞分化，而且可分泌多种促血管生成因子和抗凋亡因子而抗炎、抗氧化，可抵抗氧自由基的损伤，有望成为修复受损的组织和器官的干细胞来源。

目前，脂肪组织的采集和运输大多直接选择抽脂时的注射器作为载体，这样在运输的过程中极易发生泄漏和污染的问题，且长时间的运输和不受控制的外环境极易对脂肪干细胞的的活性造成影响。脂肪组织运输至实验室后，提取过程中多采用离心管作为容器，重复的对其进行清洗和离心，清洗完成后使用锥形瓶或离心管作为容器对脂肪组织进行消化，该清洗和消化过程为开放式的加样及取样，极易造成污染。

此外，用传统立体式容器进行脂肪消化不能全部浸入水中，从而始终无法保证容器内均匀受热，再者传统容器导热性不太好且不易于观察，从而导致脂肪组织消化时间长，消化不均一的情况出现。

发明内容

本发明就是针对现有的脂肪组织在运输、清洗和消化过程中极易发生泄漏和污染的问题，而提出一种脂肪组织干细胞的提取方法，该提取方法使得脂肪组织在运输、清洗和消化均处于一个相对封闭的无菌内环境中，降低了脂肪组织污染的概率。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：一种脂肪组织干细胞的提取方法，采用多连袋式脂肪组织干细胞提取装置进行提取，所述多连袋式脂肪组织干细胞提取装置包括依次连接的第一清洗袋、第二清洗袋、第三清洗袋和消化袋，所述第一清洗袋、第二清洗袋、第三清洗袋和消化袋之间通过导流软管相互连通；每个所述清洗袋的袋体上均设有至少一个进出样口，在所述消化袋袋体上部设有两个进出样口，一个是消化液进出样口，另一个进出样口整体呈“树枝”状，包括一主进出样口和两个分支进出样口；

按如下步骤进行：

(A1)第一清洗袋(1)内预先加有30mL脂肪组织活性剂；

(A2)关闭第一清洗袋与第二清洗袋之间的导流软管，在无菌环境下抽取50-80mL的脂肪组织通过第一进出样口注入至第一清洗袋内，晃动第一清洗袋，使得脂肪组织与脂肪组织活性剂混合均匀；

(A3)从第二进出样口注入与脂肪组织等体积的清洗液，晃动第一清洗袋充分混匀脂肪组织与清洗液；

(A4)从第三进出样口注入与脂肪组织等体积的清洗液，晃动第二清洗袋充分混匀脂肪组织与清洗液；对第二清洗袋进行离心，离心转速为400～600rpm，离心时间为5～8min，上层脂肪组织和少量的油脂通过导流软管流入第三清洗袋内；

(A5)从第四进出样口注入与脂肪组织等体积的清洗液，晃动第三清洗袋充分混匀脂肪组织与清洗液；对第三清洗袋进行离心，离心转速为400～600rpm，离心时间为5～8min；清洗离心后，将脂肪组织转入到所述消化袋内；

(A6)从消化液进出样口注入与所述消化袋内脂肪组织等体积的I型胶原酶消化液，然后将所述消化袋浸入37℃水浴中，通过磁力作用将所述消化袋固定在水浴摇床的底板上进行振动消化，以转速100-200rpm，振荡消化30-40min，并定时观察脂肪组织消化情况；