[发明专利]一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺

权利要求书

1.一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于具体包括如下步骤：

（1）原料豆粕溶解萃取：将豆粕粉碎后过100目筛，得到豆粕粉末；向豆粕粉末中加入豆粕质量比2～4%D的NaOH，然后加入豆粕10倍质量比的纯净水，搅拌均匀；在50～70℃条件下恒温浸提4～6h；浸提过程中始终保持搅拌；

（2）离心：对步骤（1）中浸提液进行离心，得到浸提液和固体残渣；

（3）盐析：向离心后的浸提液中加入中性盐，进行盐析，使蛋白沉淀；

（4）离心：对沉淀后的蛋白进行离心，分离得离心重相；

（5）脱盐浓缩：离心后的重相进行电渗析脱盐，经半透膜截留后浓缩，中性盐通过半透膜后被水带走；

（6）色谱分离：脱盐后的蛋白进入凝胶柱色谱，利用凝胶网状结构的分子筛作用，根据被分离物分子大小不同进行分离；最先流出的是11S组分，其次是7S，最后流出的是2S组分；

（7）分离提纯：利用一系列已知相对分子质量的蛋白质标准样品，在同一凝胶色谱柱内进行色谱分离，测定蛋白组分的洗脱体积，确定该凝胶色谱柱洗脱体积与相对分子质量的关系；利用此关系计算出流出蛋白对应的相对分子质量，从而实现蛋白分级分离提纯。

2.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于步骤（1）中所述NaOH的添加量为豆粕质量比的3.2%。

3.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于所述步骤（1）中的浸提温度为58～62℃，浸提时间为4h。

4.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于步骤（2）中所述离心为3000r/min条件下，离心15min。

5.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于步骤（3）中所述中性盐为硫酸镁、硫酸钠、硫酸铵、磷酸二氢钠中的一种或几种的混合物。

6.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于所述步骤（3）中所述中性盐为硫酸镁和磷酸二氢钠的混合物，其质量比为2:1。

7.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于步骤（3）中所述中性盐加入量为豆粕质量比的5%。

8.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于所述步骤（6）选用的凝胶柱色谱为交联葡聚糖凝胶Sephadex-150或Sephadex-200。

9.根据权利要求1一种功能特异性蛋白的分离提纯工艺，其特征在于步骤（4）中所述离心为3000r/min条件下，离心10min。