[发明专利]一种评估免疫细胞在深低温保藏后活性的方法

说明书

本发明公开了一种评估免疫细胞在深低温保藏后活性的方法，其特征在于，包括了测试试剂反应液(reagent)配制步骤和细胞液稀释检测步骤。本发明可以通过荧光检测复苏后的免疫细胞的ATP值对免疫细胞深低温保藏后的细胞活性快速直观的进行评估。评估更加直观和快速。

技术领域

本发明涉及生物科技领域，具体涉及一种评估免疫细胞在深低温保藏后活性的方法。

背景技术

近年来，已经建立了很多用于治疗各项疾病的免疫疗法，并且需要生长高品质的免疫细胞。各疾病患者对于免疫细胞的需求日渐增长，我们必须将免疫细胞进行深低温保藏，从而复苏后即可随时供应患者对于免疫细胞的需求。

然而经过深低温保藏后的免疫细胞活性可能受到影响，若是使用未知细胞活性的免疫细胞进行治疗或临床试验，其结果是不可靠的。因此，对于评估免疫细胞在深低温保藏后的细胞活性是十分必要的。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种评估免疫细胞在深低温保藏后活性的方法。

为了实现本发明的目的，所采用的技术方案是：

一种评估免疫细胞在深低温保藏后活性的方法，包括：

测试试剂反应液(reagent)配制步骤：

将测试试剂的基液和缓冲液进行配制得测试试剂反应液(reagent)后待用，所述测试试剂反应液为ATP反应液如CellTiter-Glo；

细胞液稀释检测步骤：

将细胞液稀释成4*10⁵/ml的细胞浓度后得细胞检测液；

将所述细胞检测液混匀后，取1ml加入带有500ul的生理盐水第一试管当中后混匀得第一试管细胞稀释液；

将所述第一试管细胞稀释液中取500ul加入带有500ul的生理盐水第二试管当中后混匀得第二试管细胞稀释液；

将所述第二试管细胞稀释液中取500ul加入带有500ul的生理盐水第三试管当中后混匀得第三试管细胞稀释液；

将所述第三试管细胞稀释液中取500ul加入带有500ul的生理盐水第四试管当中后混匀得第四试管细胞稀释液；

将所述第四试管细胞稀释液中取500ul加入带有500ul的生理盐水第五试管当中后混匀得第五试管细胞稀释液；

将所述第一至第五试管细胞稀释液中各取50ul置于96孔板后，继续添加50ul测试试剂反应液(reagent)后混匀9-11分钟后在酶标仪上读取化学发光值。

在本发明的一个优选实施例中，所述加入50ul测试试剂反应液(reagent)后混匀时间为10分钟。

本发明的有益效果在于：

本发明可以通过荧光检测复苏后的免疫细胞的ATP值对免疫细胞深低温保藏后的细胞活性快速直观的进行评估。评估更加直观和快速。

附图说明

图1为本发明的检测原理示意图。

图2为本发明的检测效果示意图一。

图3为本发明的检测效果示意图二。

具体实施方式

本发明是通过检测复苏后免疫细胞的ATP值对免疫细胞深低温保藏后的细胞活性快速直观的进行评估。

具体如图1所示，本发明是通过GTC法测定细胞裂解后ATP的荧光值：

在Mg2+，ATP和分子氧的存在下，荧光素酶催化荧光素单氧合后发光。