[发明专利]一种表达SARS-CoV-2 N蛋白的重组质粒、重组菌及构建方法和应用

说明书

本发明提供了一种表达SARS‑CoV‑2 N蛋白的重组质粒、重组菌及构建方法和应用，属于疫苗技术领域，所述重组质粒以pET‑N‑GST‑Thrombin‑C‑His为骨架质粒，插入有编码SARS‑CoV‑2 N蛋白的基因的全长序列。本发明采用pET‑N‑GST‑Thrombin‑C‑His表达载体表达SARS‑CoV‑2 N蛋白(新冠病毒核蛋白)，SARS‑CoV‑2 N蛋白的表达量高，且表达得到的SARS‑CoV‑2 N蛋白能够保持良好的蛋白活性，进而能够应用于多个免疫学检测平台，来辅助监控新冠病毒的感染和爆发。

技术领域

本发明属于疫苗技术领域，尤其涉及一种表达SARS-CoV-2 N蛋白的重组质粒、重组菌及构建方法和应用。

背景技术

2019新型冠状病毒(简称新冠病毒，英文名SARS-CoV-2)，也称为严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)，是冠状病毒科乙型冠状病毒属，严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒种的一个分型，是具有包膜的正链单股RNA，它造成了于2019年底暴发的2019新型冠状病毒感染的肺炎(COVID-19)。

新冠病毒病毒核衣壳内最重要的蛋白之一就是核衣壳蛋白(N蛋白)。N蛋白常作为冠状病毒诊断检测工具，是免疫学快速诊断试剂的核心原料。

目前，SARS-CoV-2 N蛋白用大肠杆菌表达获得比较困难，这是由于将N蛋白的编码序列克隆入一些表达载体后，常常发现其表达量符合要求，但是活性不够甚至丧失。因此，本领域迫切需要开发新的高效表达N蛋白或其片段的技术，以便能够大量生产供科研和诊断领域所需的N蛋白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种表达SARS-CoV-2 N蛋白的重组质粒、重组菌及构建方法和应用，利用本发明的重组质粒表达获得的SARS-CoV-2 N蛋白抗原性良好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种表达SARS-CoV-2 N蛋白的重组质粒，所述重组质粒以pET-N-GST-Thrombin-C-His为骨架质粒，插入有编码SARS-CoV-2 N蛋白的基因的全长序列；所述SARS-CoV-2 N蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

优选的，所述编码SARS-CoV-2 N蛋白的基因的全长序列在pET-N-GST-Thrombin-C-His上的插入位点为SalⅠ和XhoⅠa。

本发明提供了一种包括上述方案所述重组质粒的重组菌。

优选的，所述重组菌的原始菌包括大肠埃希菌BL21。

本发明还提供了上述方案所述重组菌的构建方法，包括以下步骤：

1)将所述编码SARS-CoV-2 N蛋白的基因的全长序列插入到pMD-19T质粒上，得到扩增质粒；

2)以所述扩增质粒为模板，利用第一引物和第二引物进行PCR扩增，得到PCR产物；所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述第二引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；

3)对pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒进行酶切，得到pET-N-GST-Thrombin-C-His线性质粒；

4)将所述pET-N-GST-Thrombin-C-His线性质粒和所述PCR产物连接，得到重组质粒；

5)将所述重组质粒转入原始菌，得到表达SARS-CoV-2 N蛋白的重组菌；

所述步骤1)和步骤3)之间没有时间顺序限制。