[发明专利]一种分泌外基质蛋白基因工程菌的制备方法

说明书

本发明公开了一种分泌外基质蛋白基因工程菌的制备方法，所述方法包括以下步骤：将外基质蛋白的编码基因克隆插入质粒pET‑32a(+)中；通过CaCl2转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中；获得包含该重组质粒的基因工程菌。本发明有益效果在于，遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强等。

技术领域

本发明属于重组蛋白表达领域，尤其涉及一种分泌外基质蛋白基因工程菌的制备方法。

背景技术

在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是大肠杆菌表达系统，也是目前掌握最为成熟的表达系统，大肠杆菌表达系统以其细胞繁殖快速产量高、IPTG诱导表达相对简便等优点成为生产重组蛋白的最常用的系统。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种分泌外基质蛋白基因工程菌的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种分泌外基质蛋白基因工程菌的制备方法，所述方法包括以下步骤：

S1将外基质蛋白的编码基因克隆插入质粒pET-32a(+)中；

S2通过CaCl₂转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中；

S3获得包含该重组质粒的基因工程菌。

优选的，所述外基质蛋白包括I型胶原蛋白、IV型胶原蛋白、纤连蛋白。

本发明有益效果在于，遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高、表达产物容易纯化、稳定性好、抗污染能力强等。

具体实施方式

以下将对本发明作进一步的描述，需要说明的是，以下实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。

本发明为一种分泌外基质蛋白基因工程菌的制备方法，所述方法包括以下步骤：

S1将外基质蛋白的编码基因克隆插入质粒pET-32a(+)中；

S2通过CaCl₂转化法转化至感受态细胞大肠杆菌细胞BL21(DE3)中；

S3获得包含该重组质粒的基因工程菌。

优选的，所述外基质蛋白包括I型胶原蛋白、IV型胶原蛋白、纤连蛋白。

对于本领域的技术人员来说，可以根据以上的技术方案和构思，给出各种相应的改变和变形，而所有的这些改变和变形，都应该包括在本发明权利要求的保护范围之内。