[发明专利]一种用于培养人源细胞的无血清培养基添加剂

说明书

本发明公布了一种用于培养人源细胞的无血清培养基添加剂，包括浓度为0.1—10mg/ml的白细胞裂解蛋白、0.1—5mg/ml的重组人血白蛋白、5—20μg/ml的胰岛素、10—30μg/ml的人转铁蛋白、10—60μg/ml的胆固醇、20—60μg/ml的过氧化氢酶；本发明利用白细胞裂解蛋白、重组人血白蛋白、胰岛素、人转铁蛋白、胆固醇、过氧化氢酶制备一种广谱、易保存的人源细胞培养基添加剂，能适应不同种类人源细胞的培养，克服了传统无血清培养基仅适合某一类细胞培养的缺点，并且无血清培养的安全性和人源细胞临床应用的安全性也得到了提高。

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，具体为一种用于培养人源细胞的无血清培养基添加剂。

背景技术

人源细胞的体外培养需要一定的营养环境用于维持细胞的生长和繁殖，包括蛋白质、激素、生长因子和其他营养物质等。目前，在人源细胞培养研究及生产过程中，细胞培养基最常使用的关键组分是胎牛血清。虽然在实际应用中，由于胎牛血清所含的关键因子和蛋白，使得细胞生长状态、增殖速率都比较稳定，取得了良好的实验结果，但由于血清的添加，也为人源细胞的培养带来动物蛋白，病原体及抗生素等潜在危害，并且由于其成分的不确定性、批次间不稳定，存储时间短，供应时间存在周期性，生产方式的伦理争议等原因，为包括干细胞等生物药品的开发，带来了细胞生产不稳定，后续开发困难等诸多问题。

另外，由于生物制药领域的快速发展，国内对细胞培养基的需求逐年增加，而胎牛血清作为细胞培养的常用添加物，由于产量少、产地限制等原因，一直供不应求。而细胞工程中无血清培养技术的应用，在很大程度上可以减少甚至避免含血清培养所带来的不利。因此，无血清培养基作为胎牛血清培养基的替代物，其科学性和经济性不断显现，市场规模逐年增长。仅2015年，国内对无血清培养基的需求已达到了376万升，而2016年国内无血清培养基市场规模达到了29亿元。

此外，针对血清在细胞培养中的种种缺点，2015年卫计委发布了《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则(试行)》，其中明确指出：除特殊情况外，应尽可能避免在干细胞培养过程中使用人源或动物源性血清，不得使用同种异体人血清或血浆；如必须使用动物血清，应确保其无特定动物源性病毒污染；严禁使用海绵体状脑病流行区来源的牛血清。

因此，研制开发出适合人源细胞体外生长的无血清培养基，既能满足细胞培养的要求，又能避免临床应用上因使用血清带来的诸多不利因素。

发明内容

本发明目的是针对现有技术存在的缺陷提供一种用于培养人源细胞的无血清培养基添加剂，利用白细胞裂解蛋白、重组人血白蛋白、胰岛素、人转铁蛋白、胆固醇、过氧化氢酶制备一种广谱、易保存的人源细胞培养基添加剂，旨在提高人源细胞无血清培养能力的同时，加强无血清培养的安全性，进而提高人源细胞的临床应用的安全性。

本发明为实现上述目的，采用如下技术方案：

一种用于培养人源细胞的无血清培养基添加剂，所述培养基添加剂包括浓度为0.1—10mg/ml的白细胞裂解蛋白、0.1—5mg/ml的重组人血白蛋白、5—20μg/ml的胰岛素、10—30μg/ml的人转铁蛋白、10—60μg/ml的胆固醇、20—60μg/ml的过氧化氢酶。

现有技术中，通常替代胎牛血清过程中不得不添加大量生长因子和激素，如地塞米松、表皮细胞生长因子、孕酮、皮质酮等，这类成分在细胞培养中相互影响，且由于剂量的不恰当使用，虽然可以有效促进细胞的增殖，但也会影响细胞增殖过程中二倍体的变异。因此本发明所添加物质，旨在提高人源细胞无血清培养能力的同时，加强无血清培养的安全性，进而提高人源细胞临床应用时的安全性。

进一步的技术方案中，所述白细胞裂解蛋白选自脐血来源的白细胞；所述白细胞裂解蛋白用于提供人源细胞所需的营养因子。

进一步的技术方案中，所述无血清培养基的PH值为6.8-7.4；所述无血清培养基的渗透压为280-330mOsm/kg。