[发明专利]一种昌感秋海棠的离体培养方法

说明书

本发明属于离体培养技术领域，公开了一种昌感秋海棠的离体培养方法，用秋海棠成熟叶片或叶柄进行接种，采用培养基进行初代培养获得愈伤组织；转入继代培养基分化得不定芽；转入生根培养基中培养得到无菌组培苗；组培苗转移至栽培基质进行炼苗。本发明的初代培养利用叶片进行接种较好，且选用MS+2mg/L6‑BA+0.3mg/L NAA的配比效果理想；继代培养基为MS+2mg/L 6‑BA+0.5mg/L NAA+0.4mg/L GA时，分化率最高；生根培养基以1/2MS+0.2mg/L NAA最佳，不仅生根较多，根系粗壮发达，且植株叶片硕大、茂密；栽培基质为珍珠岩+蛭石+泥炭藓的搭配能同时达到理想的疏水和保水能力，有利于昌感秋海棠的生长。

技术领域

本发明属于离体培养技术领域，尤其涉及一种昌感秋海棠的离体培养方法。

背景技术

昌感秋海棠(学名：Begonia cavaleriei Levl)是秋海棠科秋海棠属的多年生草本植物，为中国特有种，分布在贵州(安龙、亨册、荔波、独山)、广西(南丹、德保、那坡)、云南(富宁、西畴、麻栗坡)等地。野生昌感秋海棠生于山沟阴湿处岩石及石壁或石缝隙、山脚阴密林下、山谷潮湿处密林下，海拔300-1000米，生境较脆弱。

昌感秋海棠叶片翠绿，盾形，全基生，厚纸质，叶片上面被极短毛，下面近无毛，叶柄长7-25厘米，有棱无毛；花期4-7月，花白色、淡粉红色、粉红色，1-3朵，聚伞状，娇小可爱。可见，昌感秋海棠有较高的观赏价值。同时，它也是传统的中药材，全草可入药，有抗炎止痛等作用，是我国少数民族常用中草药[肖莉,蒋佳雯,杨亮,徐文芬,黄勇其.盾叶秋海棠药材镇痛及抗凝血作用的初步实验研究[J].西北药学杂志,2012,27(03):229-231.]。

秋海棠常见的繁殖方式包括种子繁殖、珠芽繁殖、块茎繁殖、叶片扦插、组织培养等。然而，种子繁殖的后代易产生变异，珠芽繁殖受到叶片和珠芽数量的限制，扦插需要较多叶片且受季节影响无法实现快速高效繁殖，组培需要探索较多的条件，生产成本高。但组培可以在短时间内获得大量后代，且很好地保持品种的优良性能，已有多种秋海棠属植物组培成功。但当前还未见昌感秋海棠相关繁殖技术的文献，若能找到一种简单快速繁殖保育的方法，对于昌感秋海棠保持其药用属性及其观赏性有很大意义。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)繁殖较慢，且限制条件多。

(2)不能有效保持昌感秋海棠的遗传稳定性。

(3)所获得的子代环境适应能力未知。

解决以上问题及缺陷的难度为：昌感秋海棠的生长习性未见报道，对其了解甚少，需要认真摸索其繁殖条件，锻炼其对环境的适应性。

解决以上问题及缺陷的意义为：保持昌感秋海棠自身遗传特性和药效的同时进行快速无菌繁殖，保护种质资源。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种昌感秋海棠的离体培养方法。

本发明是这样实现的，一种昌感秋海棠的离体培养方法，所述昌感秋海棠的离体培养方法包括：

第一步，用叶片进行接种，采用培养基进行初代培养获得愈伤组织；

第二步，愈伤组织转入继代培养基培养不定芽；

第三步，在生根培养基中进行生根培养；

第四步，炼苗秋海棠从培养基移至栽培基质。

进一步，所述第一步用叶片进行接种，采用MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA进行初代培养。

进一步，所述第二步愈伤组织转入继代培养基MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.4mg/L GA。