[发明专利]一种游离脂肪酸检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种游离脂肪酸检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其中所述R1试剂中包含缓冲液、脂酰辅酶A合成酶、辅酶A、ATP、4‑氨基安替比林、酶保护剂、表面活性剂和防腐剂，R2试剂中包含缓冲液、脂酰辅酶A氧化酶、过氧化物酶、色原底物、酶保护剂、表面活性剂和防腐剂，其中R2试剂中的色原底物为DAOS和TOOS的混合物，且DAOS和TOOS的浓度比为1:0.5～2。本发明通过对游离脂肪酸检测试剂盒中的色原底物进行优化，使试剂盒的线性范围变宽，并且还解决了血清样本中抗坏血酸和胆红素对游离脂肪检测产生干扰的问题，即获得了一种线性范围更宽，抗干扰能力更强的游离脂肪酸检测试剂盒；进一步地，本发明还优选了酶保护剂的种类和比例，从而增强了试剂盒的稳定性。

技术领域

本发明属于临床化学检测技术领域，具体涉及一种游离脂肪酸检测试剂盒。

背景技术

游离脂肪酸，即非酯化脂肪酸(non-estesterfied fatty acid,NEFA)，是人体内脂肪代谢的中间产物，也是细胞膜脂质结构的底物和前列腺素等细胞内信号分子的供体。血清中的NEFA代谢活性极高，极易受脂肪代谢、糖代谢及内分泌代谢的影响。NEFA已被证实与心脑血管、呼吸、消化、内分泌、免疫等系统疾病的发生发展，以及创伤性应激等的能量代谢关系密切。

游离脂肪酸测定试剂盒(酶法)运用的检测原理是样本中游离脂肪酸在辅酶A与腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)共同存在的条件下，由脂酰辅酶A合成酶的作用，生成了脂酰辅酶A，生成的脂酰辅酶A在脂酰辅酶A氧化酶的氧化作用下同时生成过氧化氢，通过Trinder底物在过氧化物酶(POD)的作用下，生成有色产物。在一定波长下，通过与同样处理的校准液对照，定量检测出样本中游离脂肪酸的含量。

目前市场上大部分的游离脂肪酸测定试剂盒线性范围比较窄，只能做到3.0mmol/L左右，如专利CN109521013A公开了一种游离脂肪酸检测试剂盒及生产工艺，该试剂盒的最高检测范围仅可达4.2mmol/L。而超过线性范围上限的样本需要进行稀释复测，复测结果乘以稀释倍数得到该样本结果。如果试剂盒的线性范围上限越高，则需要稀释复检的样本越少，从而减少了医院测试成本和人力需求。另外，市面上游离脂肪酸测定试剂盒经过运输或者长期储存后，试剂容易出沉淀，从而影响试剂的稳定性；也容易受抗坏血酸和胆红素等物质的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种游离脂肪酸检测试剂盒，通过将传统的色原底物更换为DAOS和TOOS的混合物，并调节两个色原底物的浓度比，同时加入特殊的酶保护剂，从而获得了一种线性范围更宽、稳定性更高、抗干扰能力更强的游离脂肪酸检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种游离脂肪酸检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，其中所述R1试剂中包含缓冲液、脂酰辅酶A合成酶、辅酶A、ATP、4-氨基安替比林、酶保护剂、表面活性剂和防腐剂，所述R2试剂中包含缓冲液、脂酰辅酶A氧化酶、过氧化物酶、色原底物、酶保护剂、表面活性剂和防腐剂，其特征在于，所述R2试剂中的所述色原底物为DAOS和TOOS的混合物，所述DAOS和TOOS的浓度比为1:0.5～2。

本发明创造性地选取了色原底物中灵敏度更高的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐(DAOS)以及抗干扰能力较强的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)，并调节两物质的配比，使游离脂肪酸检测试剂盒的线性范围更宽，同时还避免了血清中抗坏血酸和胆红素对游离脂肪酸检测的干扰问题。

优选地，所述DAOS和TOOS的浓度比为1:1。