[发明专利]一种天麻素与PEGA树脂共价偶联合成亲合层析树脂的方法及其应用

说明书

本发明公开一种天麻素与PEGA树脂共价偶联合成亲合层析树脂的方法及其应用，制备步骤包括：PEGA树脂的预处理、PEGA树脂的平衡、PEGA树脂的活化、PEGA树脂与反应催化物的结合、PEGA树脂与天麻素的共价偶联得到天麻素与PEGA树脂共价偶联亲合层析树脂；本发明制备得到的天麻素与PEGA树脂共价偶联亲合层析树脂可以运用于天麻素特异性结合分子靶点的筛选和鉴定，本发明步骤较少，操作简便，同时使用了新的反应催化剂，更加安全。

技术领域

本发明属于化学合成及分子药理学研究领域，涉及天麻素与PEGA树脂的共价偶联及以此为基础的亲合层析法筛选鉴定天麻素化合物特异性分子靶点的应用。

背景技术

天麻是传统中药里的常用配方，中医临床上用其治疗多种心脑血管疾病，如神经过度紧张、脑缺血及缺血性中风、帕金森氏病等。天麻的主要活性成分为：天麻素（即天麻苷）及其多聚物巴利森苷、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、香草醛和天麻多糖等。天麻具有显著的镇静安神和保护神经系统的药理作用。但由于天麻素等活性单体的直接作用分子靶点尚未明确，使得这些天然活性化合物的成药研究难以取得突破性进展。西医理论要求药物的化学结构明确、作用靶点明确、作用机制明确，而中药多以复方混合成分为主，分离鉴定主要的活性成分并找到它们对应的分子靶点借以阐明其作用机理是困扰中药国际化研究的最大难题。云南中药资源丰富，与天麻类似，三七、白芨、灵芝等功效显著的中药活性成分由于靶点不明、药物与靶蛋白结合的构效关系不明、作用的主要信号通路不明，所以在西药研究的科学范式下难以成药，更无法得到国际市场的认可。目前筛选鉴定药物作用靶点的方法有很多，但最为常用且最有效的是亲合层析法。

发明内容

本发明为了拓展云南特色药用植物研究的新领域，快速鉴定天麻中功效明确但药理机制不明的活性成分以利于其成药及推向国际化，提供一种天麻素与PEGA树脂共价偶联合成亲合层析柱的方法及应用。

本发明的技术方案如下：

一种天麻素与PEGA树脂共价偶联合成亲合层析树脂的方法，具体步骤如下：

（1）PEGA树脂的预处理：

取300-500mgPEGA树脂用pH8.0的Tris-HCL缓冲液1mL重悬，于小容量瓶中充分混合搅拌30分钟；

（2）PEGA树脂的平衡：

将预处理后的树脂用DMF重悬后转移至3mL玻璃柱料管中，静置，待树脂全部沉降后，用pH8.0的Tris-HCL缓冲液过柱平衡树脂3次，每次2mL；

（3）PEGA树脂的活化：

待平衡缓冲液流尽后，向柱料管中加入吡啶过柱冲洗柱料3次，每次2mL，然后用DMF将树脂从柱料管中重悬后移出至小型圆底反应瓶中；

（4）PEGA树脂与反应催化物的结合：

向反应瓶中加入溴代乙酸乙酯至浓度达到0.088mmol/L，并不断搅拌混合6小时后，将树脂用DMF重悬后转移至柱料管中，依次用二氯甲烷、甲醇、DMF分别过柱冲洗3次，每次3mL；

（5）PEGA树脂与天麻素的共价偶联：

将PEGA树脂从柱料管中用DMF重悬后转移至反应瓶中，加入天麻素至终浓度为0.08mmol/L，加入碳酸钾至终浓度为0.08mmol/L，并不断搅拌混合，反应3天后移至柱料管中，得到天麻素与PEGA树脂共价偶联亲合层析树脂。

本发明的另一个目的是将上述所合成天麻素与PEGA树脂共价偶联亲合层析树脂用于筛选和鉴定天麻素的直接结合靶点，从而进一步阐明其药理机制。

本发明的有益效果在于：