[发明专利]一种结核分枝杆菌特异性T细胞表位肽及其应用

说明书

本发明涉及一种结核分枝杆菌特异性T细胞表位多肽及应用，公开了表位肽P₃₉的氨基酸序列为LQGQWRGAAGTAAQA，分子量为1485.63。本发明筛选出的表位肽P₃₉与HLA分子之间具有高亲和力，该表位产生了较强抗原特异性的外周血单个核细胞增殖，同时该表位肽P₃₉的敏感性为75％，特异性为67.71％，AUC值为0.8435，具有较好的临床诊断价值。表位肽P₃₉未见文献报道及研究，本发明的优点在于首次报道了表位肽P₃₉用于结核病的血清学诊断，具有较高的敏感性和特异性。本发明表位肽P₃₉的确定，可应用于T细胞表位肽疫苗的制备，为结核病特异诊断试剂和新型结核病表位疫苗的研发提供了潜在的候选表位多肽，在结核病特异性免疫预防和治疗领域中有着良好的开发应用前景。

技术领域

本发明属于分子生物学和免疫学领域，涉及一种结核分枝杆菌特异性T细胞表位肽及其应用，具体是涉及一种结核分枝杆菌特异性T细胞表位制备方法及其在结核病诊断中的应用。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染性疾病，全球每年新发结核病患者人数约有800万，死亡人数超过200万，是全球重要的卫生问题。面对如此高的发病率及死亡率，传统的卡介苗已经不能满足人类预防结核病的需求，各国研究人员均在不断努力开发新型结核病疫苗，但到目前为止仍没有一种疫苗可以成功替代卡介苗而广泛应用于临床预防。结核病感染的快速诊断方法、适合中国人群的结核病疫苗和治疗药物对目前结核病的防控起着至关重要的作用，可以对结核病进行及时且正确的治疗；新的结核感染诊断方法及疫苗药物研发刻不容缓。

基于传统细菌学和免疫学的结核病诊断技术已经无法适应当前疾病流行形势，尤其是在结核病感染人数多、感染规模大的结核病流行态势下，快速准确的诊断方法是控制疾病流行蔓延的关键手段，也是进行抗结核治疗的重要前提与基础。酶联免疫吸附试验（ELISA）因具有快速、简便、高灵敏度等优点，且该技术所需设备简单、操作容易、一次可检测多个样品，现已成为部分抗体检测的首选方法。对现有商品化试剂盒的meta分析表明，在结核病的诊断中，现有的商品化血清学检测方法均未达到理想的诊断效果。

培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10，CFP10)是血清学检测活动性结核的标志物，为目前诊断结核病领域研究范围最广、最重要的抗原，它是从结核分枝杆菌短期培养的滤液中分离的一种低分子质量蛋白质, 含100个氨基酸。CFP10为一种有效的T细胞抗原, 能刺激机体产生特异性细胞免疫应答, 可以诱发PPD皮肤试验阳性者的外周血单个核细胞出现增殖反应和产生IFN-γ, 而IFN-γ能显著活化巨噬细胞, 提高巨噬细胞对胞内结核菌的生长抑制作用和杀伤能力。抗原表位是免疫原抗原性的物质基础，开展对抗原表位的研究将对抗原的诊断以及分子疫苗的设计等具有重要的意义，表位肽可以完全通过人工合成获得，研发周期短；由于剔除了表位肽以外病原体其他有害成分，安全性良好；还可以将多个表位肽串联使用，加强免疫效果和减少免疫逃逸。目前已知的结核菌表位肽主要是在欧美人群中鉴定，多为HLA-A*0201限制性，而对于结核病流行最严重的非洲和东南亚人群，并没有合适的表位肽可使用，而CFP10蛋白存在多个T细胞表位多肽，其多肽混合物中的每一个多肽都具有广泛的识别类型，这在疫苗的设计中具有重要意义, 有效的疫苗应该含有多个抗原决定簇, 而且可以被不同遗传背景的人群所识别。