[发明专利]一种酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，冻干粉中酪酸梭状芽孢杆菌的芽孢率大于90％，冻干粉中活菌数为2.0×10¹⁰cfu/g～3.0×10¹⁰cfu/g。

2.根据权利要求1所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，其制备原料包括酪酸梭状芽孢杆菌湿菌泥和保护剂，其重量比为(1～0.2)：(0.1～1)；所述酪酸梭状芽孢杆菌湿菌泥中含有酪酸梭状芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，所述保护剂选自脱脂奶粉、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、β-环糊精、甘露醇、甘油中一种或多种。

4.根据权利要求3所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，所述保护剂包括脱脂奶粉和海藻糖，重量比为(0.8～10)：1。

5.根据权利要求2～4任一项所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，培养酪酸梭状芽孢杆菌的液体发酵培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、维生素B1和蒸馏水；所述碳源选自葡萄糖、可溶性淀粉、玉米浆粉、大豆浆粉、蔗糖中一种或多种；所述氮源选自胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母浸粉、酪蛋白胨、牛肉浸膏、L-半胱氨酸、谷氨酸、丙氨酸、消化血清粉、硫酸铵、豆饼粉、尿素、氯化铵中一种或多种；所述无机盐选自醋酸钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、碳酸钙、碳酸氢钠中一种或多种。

6.根据权利要求5所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，所述液体发酵培养基成分中所述碳源包括：25～35g可溶性淀粉、5～15g葡萄糖；所述氮源包括5～20g胰蛋白胨、5～25g大豆蛋白胨、10～20g酵母浸粉、5～20g酪蛋白胨、10～20g牛肉浸膏、1～2g L-半胱氨酸、0.1～1g谷氨酸、0.1～1g丙氨酸、10～15g消化血清粉；所述无机盐包括5～15g醋酸钠、1～5g磷酸氢二钾、1～5g磷酸二氢钾、10～20g碳酸钙。

7.根据权利要求6所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉，其特征在于，所述液体发酵培养基成分还包括0.5～1.5g硫酸镁、0.5～1.5g硫酸锰。

8.一种根据权利要求1～7任一项所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉的制备方法，其特征在于，其包括下面步骤：

(1)菌种培养：培养酪酸梭状芽孢杆菌至稳定期，芽孢率大于90％且芽孢脱落率大于10％，获得酪酸梭状芽孢杆菌发酵液；

(2)收集菌体：将酪酸梭状芽孢杆菌发酵液沉淀，获得酪酸梭状芽孢杆菌湿菌泥；

(3)添加保护剂：将酪酸梭状芽孢杆菌湿菌泥和保护剂混合得到混合物；

(4)真空冷冻干燥：将混合物于25～37℃平衡20～60min，-40℃预冻6～12h，然后在3～8Pa下冷冻干燥16～28h，即得。

9.根据权利要求8所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉的制备方法，其特征在于，其包括下面步骤：

(1)菌种活化：在无菌室中，将低温保存的酪酸梭状芽孢杆菌菌种溶解在20～30mL无菌生理盐水中，振荡3～5min后于75～85℃水浴振荡10～20min，振荡频率为110～130r/min，得到菌种混合液；

(2)扩大培养：将菌种混合液依次在一级种子培养基、二级菌种液体培养基、三级菌种液体培养基中培养，得到三级酪酸梭状芽孢杆菌培养液；

(3)发酵培养：将三级酪酸梭状芽孢杆菌培养液于液体发酵培养基中培养至酪酸梭状芽孢杆菌至稳定期，芽孢率大于90％且芽孢脱落率大于10％，获得酪酸梭状芽孢杆菌发酵液；

(4)收集菌体：在离心机上于4℃、4500～5500rpm转速条件下离心酪酸梭状芽孢杆菌发酵液，离心时间为15～25min，弃上清，获得酪酸梭状芽孢杆菌湿菌泥；

(5)添加保护剂：将酪酸梭状芽孢杆菌湿菌泥和保护剂混合得到混合物；

(6)真空冷冻干燥：将混合物于25～37℃平衡20～60min，-40℃预冻6～12h，然后在3～8Pa下冷冻干燥16～28h，即得。

10.一种根据权利要求1～7任一项所述酪酸梭状芽孢杆菌冻干粉在保健食品、医疗生物制剂中的应用。