[发明专利]一种分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法

说明书

本发明公开了一种分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法，包括参数：色谱柱：C18柱；流动相A相：由甲醇‑四氢呋喃‑水按体积比15:5:80混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的Boc‑5‑氯‑DL‑色氨酸；流动相B相：由甲醇‑四氢呋喃‑水按体积比75:5:20混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的Boc‑5‑氯‑DL‑色氨酸；洗脱方式：梯度洗脱；流动相流速：1.0mL/min；柱温：30℃。本发明提供了一种分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法，他达拉非与其三种手性异构体在该HPLC色谱条件下能有效分离。本发明提供的方法只需要常规的C18反相硅胶柱，无需手性色谱柱，成本低。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法。

背景技术

他达拉非是一种环磷酸鸟苷特异性磷酸二酯酶5(PDE-5)的选择性可逆抑制剂，能特异性的抑制PDE-5，现主要用于治疗勃起功能障碍(ED)，能够有效的治疗各类疾病(糖尿病、高血压、BPH及LUTS、前列腺癌切除/放疗后)合并的ED，能使ED患者恢复自信与自尊，改善与性伴侣的关系，提高生活质量。另外，他达拉非在2009年先后被美国FDA和欧盟批准用于治疗肺动脉高压，提高患者的运动耐力。

他达拉非有两个手性中心，因此其有三个同分异构体，其中两个是非对映异构体，一个是对映异构体，四个化合物的化学式如下。

由于两个非对映异构体与他达拉非只有一个手性中心不同，因而易于分离开。难就难在他达拉非与其对映异构体的分离。

靖雅等提供了一种手性色谱柱分离他达拉非与其手性异构体的方法，使用了CHIRALPAK IB手性柱(HPLC测定他达拉非中的对映异构体和非对映异构体，中国现代应用药学2017年1月第34卷第1期)。但是，这种手性色谱柱较为昂贵，且使用寿命短，所以成本高。

手性流动相色谱法是一种采用添加了手性试剂的流动相进行手性异构体(对映体)分离的色谱技术。该方法使用普通填料的色谱柱即可实现手性异构体(对映体)的分离，成本低。

目前未见手性流动相色谱法成功用于他达拉非与其对映异构体分离的报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术中存在的缺陷和不足，提供一种分离他达拉非与其对映异构体的HPLC方法。

实现上述目的的技术方案如下：

一种分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法，包括如下色谱参数：

色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相A相：由甲醇-四氢呋喃-水按体积比15:5:80混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的Boc-5-氯-DL-色氨酸，临用现配；

流动相B相：由甲醇-四氢呋喃-水按体积比75:5:20混合而成，并添加终浓度为200μg/mL的Boc-5-氯-DL-色氨酸，临用现配；

洗脱方式：梯度洗脱；

洗脱程序：0→10min，0％B→40％B；10→30min，40％B；30→35min，40％B→0％B；35→40min，0％B；

流动相流速：1.0mL/min；

柱温：30℃。

根据上述分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法，色谱柱优选Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。

根据上述分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法，检测波长为285nm。

根据上述分离他达拉非与其手性异构体的HPLC方法，进样量为10μL。