[发明专利]气相色谱-质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法

说明书

本发明涉及一种气相色谱‑质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法，其方法步骤包括，S1:通过加入19‑羟基胆固醇作为内标物进行样品脂类提取：S2:溶解得到的脂类提取物，再经皂化萃取除去水分，获得浓缩滤液；S3:净化浓缩：加入3mL正己烷分震荡溶解，加入至已活化的NH2‑SPE中，洗柱后弃掉废液，收集滤液氮气吹干；S4:衍生化：加入100μL的N,O‑双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺BSTFA衍生40min，并用氮气吹干，用1.0mL正己烷溶解定容；S5:取9种胆固醇氧化物混合标准溶液，在气相色谱条件和质谱条件下对其进行检测，并绘制标准曲线。本发明建立了适用于复杂样品的前处理方式，优化了皂化条件，固相萃取柱，采用内标物提高分析检测的准确性，具有准确、高效以及适用性广的优势。

技术领域

本发明涉及胆固醇氧化物检测技术领域，特别涉及气相色谱-质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法。

背景技术

胆固醇氧化物(cholesterol oxidation products，COPs)是胆固醇的氧化产物，普遍存在于肉制品、乳制品、蛋制品和动物脂肪中。在食品制作工艺流程和处理过程中，胆固醇通过光，氧及高温等作用下容易发生自身的氧化反应进而衍生成胆固醇氧化产物。

医学研究表明，食源性胆固醇氧化物会对健康造成一定损害，研究已指出胆固醇氧化物与人体动脉粥样硬化、细胞毒性作用、基因突变，甚至是致癌有直接关系。胆固醇氧化物已成为食品安全关注的新热点，但是目前对食品中胆固醇氧化物还难以进行有效监管，主要是因为缺少胆固醇氧化物检测的国家标准或相关的指导文件。同时，没有可参考的标准处理方法来处理不同类型的复杂样品，现有的胆固醇氧化物的检测方法具有一定局限性，不能满足对复杂食品中胆固醇氧化物的检测的需求。为了提升对食品中胆固醇氧化物的检测能力，建立一种准确高效的食品中胆固醇氧化物的分析检测方法尤为重要。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供气相色谱-质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法，解决了现有技术中复杂样品内胆固醇氧化物检测局限性的问题，具有准确高效，检出限、灵敏度高，重复性好的优势。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种气相色谱-质谱联用法检测食品中9种胆固醇氧化物的方法，所述检测方法为：S1:样品脂类提取：准确称取2.0g均质粉碎的样品于三角瓶中，加入2μg 19-羟基胆固醇作为内标物，加入150ml体积比为2：1的三氯甲烷、甲醇为提取剂，充分震荡2min，然后超声30min；置于4℃环境中过夜，静置分层，再用滤纸过滤，获得滤液，氮气吹干，得到脂类提取物；

S2:皂化：向得到的脂类提取物中加入10mL浓度为1mol/L的KOH溶液，10mL甲醇，充分震荡，超声5min，使脂类提取物混合溶解，室温下静置皂化10h，然后用10mL去离子水转移至分液漏斗中，再用10mL乙酸乙酯重复萃取3次，移取上层溶液，再用10mL去离子水冲洗萃取液；然后，经无水硫酸钠脱水在滤纸上过滤，除去水分；再用10mL乙酸乙酯冲洗一遍，获得滤液，旋转蒸发仪上浓缩至近干；

S3:净化浓缩：向得到的皂化后的提取物中加入3mL正己烷，充分震荡溶解，然后缓慢加入到已活化的NH2-SPE中，依次用10mL体积比为95:5的正己烷、乙酸乙酯，和10mL体积比为90:10的正己烷、乙酸乙酯洗柱，弃掉废液，最后用5mL丙酮洗柱，收集滤液，氮气吹干；

S4:衍生化：加入100μL的N,O-双(三甲基硅烷)三氟乙酰胺BSTFA，60℃下，衍生40min，衍生结束之后，用氮气吹干，用1.0mL正己烷溶解定容，上机测试；

S5:取浓度为0.2μg/mL的9种胆固醇氧化物混合标准溶液，在气相色谱条件和质谱条件下分别对其进行检测，以9种胆固醇氧化物的定量离子峰面积与19-羟基胆固醇的定量离子峰面积的比值为纵坐标，以9种胆固醇氧化物工作液浓度19-羟基胆固醇的浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线，标准曲线的线性回归方程如表1所示：