[发明专利]一种含人端粒酶逆转录酶纳米透皮脂质体的制备方法及应用

说明书

本发明公开一种含人端粒酶逆转录酶纳米透皮脂质体的制备方法，所述方法包括以下步骤：使用乙醇溶液将卵磷脂、胆固醇、PEG‑2000在磁力搅拌的条件下混匀，获得混合液一；配置hTERT水溶液，在磁力搅拌的条件下混匀，获得混合液二；将所述混合液一与混合液二混合获得混合液三；将所述混合液三使用磁力搅拌器搅拌后进行超声处理；将经过超声后的混合液三继续使用磁力搅拌器搅拌；将获得的脂质体用无菌滤器进行过滤；将过滤后的溶液存于无菌离心管中。本发明有益效果在于，该纳米透皮脂质体具有良好的透皮性和生物活性，能够用作化妆品中面膜、爽肤水、冻干粉等的添加剂，具有良好的面部细胞抗衰老作用；同时该脂质体功效温和，不会给面部细胞增加额外的负担。

技术领域

本发明属于医学美容领域，具体涉及一种含人端粒酶逆转录酶纳米透皮脂质体的制备方法及应用。

背景技术

衰老是生物体发育成熟后，随着年龄的增加，机体组织器官的机能逐渐减退，最终趋向死亡的过程。面部皮肤衰老是人体衰老的直观表现，皮肤的衰老主要表现为皮肤松弛、出现皱纹、色素斑点沉着、色泽暗淡等。衰老一直是生命科学关注的重点领域。细胞发生衰老的机制包括复制性衰老、DNA损伤诱导性衰老、原癌基因诱导衰老等。其中细胞连续复制导致的衰老是最常见的。

在正常的人体细胞分裂过程中，随着细胞分裂次数的增加，细胞的端粒会不断缩短，最终导致细胞的衰老和死亡。端粒位于染色体的末端，能够保护亚端粒区遗传信息的稳定。作为一种生物衰老相关的重要标志物，端粒在细胞复制性衰老的病理生理过程中起着决定性作用。如果染色体中的端粒在细胞复制过程中不变短，细胞就不会衰老。

端粒酶的相对分子质量为200-500KD,是细胞中负责延长端粒的一种核糖核蛋白复合体，其活性与人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达密切相关。研究表明外源性hTERT可以提高细胞端粒酶的活性，赋予细胞延缓衰老或永生化能力。

发明内容

人端粒酶逆转录酶要到达面部皮肤的真皮层细胞内发挥作用，需要通过致密的角质层和细胞膜结构。同时人端粒酶逆转录酶本质上属于蛋白质，对于环境中的光、温度、Ph变化非常敏感，也容易造成端粒酶的失活。基于以上缺点，我们构建了一种磷脂双分子层的类似细胞膜结构的纳米脂质体。通过该纳米脂质体包裹人端粒酶逆转录酶，不仅能够实现长时间保持端粒酶的活性，也能够使包裹的端粒酶顺利到达真皮层的细胞内发挥作用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种含人端粒酶逆转录酶纳米透皮脂质体的制备方法，所述方法包括以下步骤：

S1使用乙醇溶液将卵磷脂、胆固醇、PEG-2000在磁力搅拌的条件下混匀，获得混合液一；

S2配置0.1-0.5mM的hTERT水溶液，在磁力搅拌的条件下混匀，获得混合液二；

S3将所述混合液一缓慢滴入所述混合液二中,获得混合液三；

S4将所述混合液三使用磁力搅拌器搅拌2h；

S5将经过S4搅拌的混合液三放入超声波仪器中，超声45min；

S6将经过S5超声后的混合液三继续使用磁力搅拌器搅拌10h，获得脂质体；

S7将S6获得的脂质体用无菌滤器进行过滤；

S8将S7过滤后的溶液存于无菌离心管中，并放于4℃环境中保存，即获得含人端粒酶逆转录酶纳米透皮脂质体。

优选的，所述卵磷脂、所述胆固醇、所述PEG-2000的摩尔比为15：23：6。

优选的，所述步骤S1、步骤S4、步骤S6的磁力搅拌器的搅拌速度为1000-3000转/分。