[发明专利]一种生物阴性样本、生物标准品的制备方法及TMAO检测方法

说明书

本发明公开了一种生物阴性样本、生物标准品的制备方法及TMAO检测方法，涉及检测技术领域，所述生物阴性样本的制备方法包括取生物样本，向所述生物样本中加入特异性去除TMAO的微生物，反应完后除去微生物得到所述生物阴性样本。本发明方案设计巧妙，操作简便，实用性强，整个过程无需昂贵的仪器设备或复杂的操作过程，即可实现快速、简便的TMAO阴性样本制备，可实现直接将多份生物样本混合后集中加入微生物统一处理，消除TMAO，相比于逐一寻找低TMAO值样本更便捷、经济且可实现批量制备；后续通过对微生物灭活或过滤等方式即可实现过量微生物的去除，使得其还可进一步应用于TMAO标准品的制备中。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种生物阴性样本、生物标准品的制备方法及TMAO检测方法。

背景技术

氧化三甲胺(Trimetlylamine oxide，TMAO)是一种肠源性菌群相关代谢产物，在肝脏中合成。生物体内的胆碱、左旋肉碱、甜菜碱等生物碱在肠道菌群的作用下转化三甲胺(trimethylamine，TMA)，TMA在三甲胺氧化酶的作用下转化为氧化三甲胺，后经肾脏代谢随尿液排出。相关研究表明，TMAO与心血管疾病、慢性肾病肾功能不全和死亡风险、II型糖尿病、胰岛素抵抗、非酒精性脂肪肝及某些癌症的发生发展都有一定关联。因此，检测生物样本中的氧化三甲胺含量具有重要意义。

在检测实验或检测产品设计过程中，通常需要用到阴性对照，由于生物样本(如血液、尿液或组织液等)通常是一个复杂的体系，其中，含有多种蛋白及各类化学成分，因此，传统检测技术通常采用水、磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline，PBS)或人血清白蛋白等空白生物基质作为阴性对照，这些方案虽然能一定程度上扣除系统中的背景干扰，然而，由于生物样本成分复杂，因此，传统阴性对照仍然无法消除基质效应，其测定结果通常因各种误差导致其方法学验证说服力不佳，尤其是无法满足药典法规《生物样品定量分析方法验证指导原则》中对于基质效应的阐释要求。

部分研究表明可通过寻找低TMAO值样本，然而，由于该类样本数量有限且寻找过程较繁杂，因此，实用性不强。中国发明专利申请文件CN109387410A公开了一种TMAO阴性样本及其制备方法与应用，具体公开了通过在生物样本中加入雷氏盐以除去样本中所含有的TMAO，该方法虽然能实现消除空白基质中TMAO背景干扰的目的，采用化学络合剂反应存在明显缺陷，如：1、反应过程较为剧烈，反应后将产生大量沉淀，而这些沉淀将会对样本中其他成分造成影响；2、由于生物样本中TMAO含量相对较低，加入的还原剂易过量，而过量的还原剂难以彻底去除或恰好反应完全，导致得到的阴性样本无法通过后期加入TMAO，制备成TMAO生物标准品；3、雷氏盐还具有剧毒，极易入眼或粘附在皮肤上，产生强烈刺激；反应过后的样本对水体是极其有害，即使小量产品也不能接触地下水，水道或污水系统，因此对实验操作人员和环境都存在极大的安全隐患。

因此，开发一种反应条件温和、操作便捷，且安全的用于制备TMAO生物标准品的生物样本的制备方法具有重要意义。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种生物阴性样本的制备方法，能够在温和条件下制得TMAO阴性样本，且该阴性样本可进一步用于制备生物标准品。

本发明还提出一种利用上述TMAO阴性样本制得的TMAO生物标准品的方法。

本发明还提出一种TMAO检测方法。

根据本发明的第一方面实施方式的方法，包括以下步骤：

取生物样本，向所述生物样本中加入特异性去除TMAO的微生物，反应完后除去微生物得到所述生物阴性样本。