[发明专利]一种单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条

说明书

本发明提供单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条，具有依次排列的样品垫、是硝酸纤维素膜和吸水垫，其特征在于：其中，洗涤的抗原喷涂于所述是硝酸纤维素膜上形成检测线，荧光标记的兔抗羊抗体喷涂于C线处形成质控线，荧光标记的羊抗鼠抗体喷涂于反应微孔，用于捕捉待测目标抗体。另外，本发明还提供了单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条在检测单克隆抗体效价和特异性荧光中的应用。本发明的试纸条灵敏度高、测试结果无漏检、时间短。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条。

背景技术

1975年德国学者Kohler和Milstein成功将骨髓瘤细胞和产生抗体的B淋巴细胞融合为杂交瘤细胞，这种杂交瘤细胞既具有可产生只针对某一特定抗原决定簇的单克隆抗体的B淋巴细胞特性，同时也具有瘤细胞无限增殖的特性。杂交瘤技术的创建，开创了抗体制备的新纪元，结合纳米粒子、电化学、核酸传感器和芯片等新材料和新技术的改进，使得单克隆抗体已经广泛应用于食品安全有害物检测、疾病早期筛查和免疫治疗等领域。

在单克隆抗体的实际应用过程中，如何快速的挑选出特异性较好、广谱性强、效价高的抗体或杂交瘤显得尤为关键。目前，对单克隆抗体的筛选、效价的测定均依赖间接ELISA方法，该方法主要是将抗原固定在固相载体上，封闭，洗脱，与目标的抗体孵育，洗脱，与酶标抗体孵育，洗脱，形成抗原-抗体-酶标抗体的三元复合物，催化底物形成有色物质，产物的量与抗体的量直接相关，每次测定时间需要5h-24h，劳动强度高，时间长。

单克隆抗体的特异性不仅针对抗原特异性，还包括针对抗原近亲家族的特异性，同时包括测试体系中的交叉反应特异性。

目前，针对抗原特异性的杂交瘤分选方法除了上述的间接ELISA法，还有基于半固体的细胞膜荧光免疫吸附测定法、流式细胞仪分选方法、全自动高效细胞株筛选系统ClonePix FL等方法。基于半固体的细胞膜荧光免疫测定法主要是将抗原与油链连接，与荧光标记的二抗一起加入到含有杂交瘤细胞的半固体培养基中，油链锚定在瘤细胞膜上，分泌的抗体与锚定在瘤细胞上的抗原结合，荧光标记的二抗与抗体结合，洗脱未结合的抗原和二抗，通过倒置荧光显微镜观察，最终在产抗原特异性的抗体的杂交瘤细胞周围形成绿色荧光聚集的现象。流式细胞仪分选方法主要是通过将荧光标记的抗原和IgG与杂交瘤一起孵育，经流式细胞仪探测器对含有双荧光信号的杂交瘤进行识别和挑选。全自动高效细胞株筛选系统ClonePix FL则是通过荧光标记的抗原或者荧光二抗包埋在半固体培养基中，杂交瘤分泌的抗体与荧光标记的抗原或者抗体结合形成聚合物，呈现荧光聚集的现象，通过仪器的识别、定位和挑选，实现对产抗原特异性抗体或者产抗体的杂交瘤进行挑选。而对抗原近亲家族的特异性和测试体系交叉反应特异性依然只依赖间接ELISA方法，需要将不同的测试物包被在微孔中，并做好相关的记录，按照上述测抗原特异性的方法进行测试，这种方法费时费力，难以将高质量可大范围应用的抗体挑选出来。

因此，设计一种检测便捷、快速的试纸条，可大大提高单克隆抗体筛选和制备的效率，能够使高质量的抗体得到快速的应用。

发明内容

本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条。

本发明提供了一种单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条，具有依次排列的样品垫、是硝酸纤维素膜和吸水垫，具有这样的特征：其中，洗涤的抗原喷涂于是硝酸纤维素膜上形成检测线，荧光标记的兔抗羊抗体喷涂于C线处形成质控线，荧光标记的羊抗鼠抗体喷涂于反应微孔，用于捕捉待测目标抗体。

本发明还提供了单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条在检测单克隆抗体效价和特异性荧光中的应用。

发明的作用与效果

本发明的单克隆抗体效价快速测定免疫荧光试纸条，能够进行便捷、快速的单克隆抗体效价及特异性快速测定，可大大提高单克隆抗体筛选和制备的效率，能够使高质量的抗体得到快速的应用。