[发明专利]表达重组HSV-1 US11蛋白的工程细胞及其在提高慢病毒包装效率中的应用

说明书

本文涉及一种在其胞内表达重组HSV‑1 US11蛋白或其突变体的工程细胞及其在提高慢病毒包装效率中的应用。

技术领域

本发明涉及病毒转染领域，具体涉及提高慢病毒产量的工程细胞和方法。

背景技术

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。慢病毒介导的基因表达持续且稳定，并随细胞基因组的分裂而分裂。慢病毒具有宿主范围广，免疫原性低，基因容量大，可以长期表达等优点，已被广泛地应用于基础研究和临床试验中。

慢病毒包装系统主要有慢病毒表达载体和包装载体及胞膜载体构成，包装病毒所用细胞一般为293T细胞，其主要过程是将组成慢病毒系统的质粒共转染293T细胞，48-72h后收集细胞培养基上清，从而获得所需的慢病毒。近年来，研究者对慢病毒生产过程的多个步骤进行了优化(例如，转染条件，质粒比例，细胞培养条件等)以提高病毒生产力(Ansorgeet al. 2010)。然而，目前慢病毒生产的滴度仍然较低，大大限制了慢病毒在疾病治疗中的应用，本领域亟需提高细胞生产慢病毒包装效率的方法。生产慢病毒效率低的一个重要的原因在于，293T细胞中进行慢病毒包装时，能刺激细胞产生一系列的抗病毒蛋白来抑制慢病毒的产生，从而降低了慢病毒的包装效率。293T细胞作为慢病毒包装工具细胞，已经人为转导整合了腺病毒的E1A、E1B基因以及猴空泡病毒40的大T抗原基因，可能一定程度上抑制了宿主的抗病毒作用。

发明内容

本发明提供一种用于包装或生产慢病毒的工程细胞，所述工程细胞表达重组HSV-1 US11蛋白与其具有至少80%序列相同性并具有提高慢病毒滴度或产量的功能的突变体。

在一个或多个实施方案中，所述重组HSV-1 US11蛋白的氨基酸序列是SEQ ID NO:1。

在一个或多个实施方案中，所述慢病毒是HIV-1型慢病毒。

在一个或多个实施方案中，所述工程细胞含有重组HSV-1 US11蛋白的编码序列或包含所述编码序列的核酸构建物，所述重组HSV-1 US11蛋白的编码序列是SEQ ID NO:2或与其具有至少60%相同性的突变体。

在一个或多个实施方案中，所述含HSV-1 US11蛋白的编码序列的核酸构建物是质粒pcDNA3.1。

在一个或多个实施方案中，所述工程细胞是293细胞。

在一个或多个实施方案中，所述工程细胞是HEK293或293T细胞。

在一个或多个实施方案中，所述工程细胞还含有用于慢病毒包装的多核苷酸或核酸构建物。

在一个或多个实施方案中，用于慢病毒包装的多核苷酸或核酸构建物包含病毒包装元件，所述病毒包装元件包含编码病毒结构蛋白、病毒调节蛋白和任选的辅助蛋白或与它们具有80%相同性并具有相应功能的突变体的基因。

在一个或多个实施方案中，病毒结构蛋白基因包含gag、pol和/或env。

在一个或多个实施方案中，病毒调节蛋白基因包含rev和/或tat。

在一个或多个实施方案中，辅助蛋白基因包含vif、vpr、vpu和/或nef。

在一个或多个实施方案中，所述病毒包装元件，包括gag、pol、rev、vsvg和/或tat。

在一个或多个实施方案中，用于慢病毒包装的多核苷酸或核酸构建物选自以下的一种或多种或全部：包膜质粒、包装质粒、穿梭质粒。