[发明专利]一种腈菌唑胶体金检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种腈菌唑胶体金检测试剂盒及其应用，所述检测试剂盒包括试剂盒盒体，在所述盒体内有一次性吸管、样本提取液及检测试纸卡；其中，所述检测试纸卡包括底板、吸收垫、反应膜、吸水垫；所述检测试纸卡反应膜上包被有腈菌唑半抗原‑HSA偶联物构成的检测线和包被有抗抗体构成的质控线；所述吸收垫内包被有腈菌唑特异性抗体‑胶体金标记物。本发明腈菌唑胶体金检测试剂盒是利用胶体金免疫层析技术对样本中腈菌唑药物残留进行检测，与现有技术相比，具有成本低、重复性好，检测快速，检测灵敏度高等优点，是特别适用于粮食、烟草中腈菌唑残留检测的试剂盒。

技术领域

本发明涉及胶体金免疫层析快速检测技术，具体涉及一种腈菌唑胶体金检测试剂盒及其应用。

背景技术

腈菌唑是三唑类杀菌剂，主要对病原菌的麦角淄醇的生物合成起到抑制作用，同时对表角甾醇生物合成具有抑制作用，具有内吸性强，药效高，对作物安全，持效期长的特点，常用于预防和治疗蔬菜、水果及烟草生产过程中的常见疾病，如防治苹果、梨的白粉病、锈病和黑星病，黄瓜的白粉病，烟草的白粉病，防治麦类散黑穗病、坚黑穗病、网腥黑穗病、小麦茎枯病、网斑病、大麦条纹病。腈菌唑在农作物中长期使用会产生一定的农药残留，如果人们长时间摄入，会对人体的健康产生威胁，主要会损害神经系统，降低人体的免疫机能、诱发肿瘤等，因此必须重视腈菌唑残留的问题。

目前，对于腈菌唑药物的检测，广泛应用的是仪器检测方法，仪器检测方法虽然检测灵敏度高，检测结果准确，但是存在成本高，检测速度慢，对于样本、设备和检测人员要求严格的特点，不利于快速检测。免疫学检测方法相对检测成本低，检测快速，对检测人员要求低，能适用于大量样本的现场快速检测，尤其是胶体金免疫层析检测方法是近来较为理想的免疫学检测方法。但是目前现有的免疫学检测方法，仍存在检测灵敏度低，重复性差，检测结果不准确、检测所需时间稍长的缺点。

发明内容

为解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种腈菌唑胶体金检测试剂盒。

一种腈菌唑胶体金检测试剂盒，包括试剂盒盒体，所述盒体内有一次性吸管、样本提取液及检测试纸卡，其中检测试纸卡包括底板、吸收垫、反应膜、吸水垫，所述反应膜上腈菌唑半抗原-HSA偶联物构成的检测线和包被有抗抗体构成的质控线，所述吸收垫上包被有腈菌唑特异性抗体-胶体金标记物。

优选的，胶体金粒径为30 nm，30 nm胶体金与腈菌唑抗体的结合能力较强，能形成牢固的结合物，以便更好的检测样本中腈菌唑药物，有效提高腈菌唑胶体金检测试剂盒对腈菌唑药物检测的敏感度。优选的，30 nm胶体金颗粒的制备工艺为：取0.01%氯金酸100mL，加热煮沸后，加入1%柠檬酸三钠1.6 mL，煮沸10 min，出现透明的橙红色，自然冷却，得到30 nm胶体金，颗粒大小均匀，无聚集现象。

腈菌唑特异性抗体-胶体金标记物包被在吸收垫上，将传统的样本垫与金标结合物释放垫结合，简化了试纸生产的过程，减低了生产成本，减少了检测批间差异，提高了检测的可重复性，且检测时间更短。

优选的，腈菌唑半抗原-HSA偶联物由腈菌唑半抗原与HSA偶联得到，

所述腈菌唑半抗原由下述步骤制备得到：称取0.86 g腈菌唑于100 mL圆底烧瓶中，加入20 mL丙酸溶解，加入琥珀酸酐0.5 g，无水三氯化铝0.5 g，80℃回流反应10 h，反应结束后，冷却至室温；用丙酮洗涤2次，100℃将反应液蒸干，得油状物；上硅胶柱，乙酸乙酯：石油醚=2：1，洗脱分离纯化，得到腈菌唑半抗原溶液，100℃蒸干，得固体腈菌唑半抗原。

优选的，检测试纸卡还设置有塑料外盒，塑料外盒上对应吸收垫的上方设置有加样孔，塑料外盒上对应检测线和质控线的上方设置有观察窗口。

优选的，所述样本提取液为含70%乙醇，pH6.0，0.05 mol/LMES缓冲液。

本发明还提供了一种腈菌唑胶体金试剂盒在检测粮食、烟草中腈菌唑药物残留的应用，其检测灵敏度高达0.01 μg/g。