[发明专利]特异性结合肝癌干细胞的抗体及其在制备肝癌检测试剂盒中的用途

说明书

本发明涉及特异性结合肝癌干细胞的抗体及其在制备肝癌检测试剂盒中的用途，该抗体不仅与人正常细胞等无交叉反应，还具有较好的特异性，可广泛应用于人肝癌的定性、定量诊断，以及在检测以及流行病调查均具有较大的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体的涉及生物抗体领域，更具体的涉及特异性结合肝癌干细胞的抗体及其在制备肝癌检测试剂盒中的用途。

背景技术

近几十年来恶性肿瘤的治疗取得了很大进步，但是在常规治疗后肿瘤的复发与转移仍然是现今需要面对的严峻问题。肿瘤干细胞假说是近年来提出的一种新理论，假说认为肿瘤由肿瘤干细胞和一般肿瘤细胞组成(肿瘤的异质性)，肿瘤干细胞是存在于肿瘤组织中的极少的具有自我更新、不定潜能性并促使肿瘤形成的细胞，是形成不同分化程度的肿瘤和肿瘤不断生长扩散的根源。肿瘤干细胞理论促使研究人员重新审视肿瘤起始、发展和治疗中抗药性的原因，并为肿瘤的早期诊断、治疗及预后判断提供了新的思路。而寻找和鉴定特异性的肿瘤干细胞分子表面标记物，识别肿瘤组织中的肿瘤干细胞是肿瘤干细胞靶向治疗的关键。

肿瘤干细胞和干细胞除了拥有许多共同的细胞表面抗原标记外，肿瘤于细胞还具有一些特异的细胞表面抗原标记，这些表面标记犹如肿瘤干细胞的“指纹”，研究者可以通过识别和利用这些表面标记来准确地筛选与分离肿瘤干细胞；此外，这些标记大多与恶性肿瘤中致癌、转移、复发相关的标记相似，证明了肿瘤干细胞与肿瘤发生发展、转移及复发的相关性。

目前，鉴定肿瘤干细胞最权威的方法是筛选确定肿瘤干细胞特异的细胞表面标记物，并根据这些标记物分离肿瘤干细胞。一般程序为：原代培养肿瘤干细胞；根据细胞表面特异性标记物，采用流式细胞仪分离肿瘤干细胞样细胞；鉴定其自我更新能力、增殖能力和分化能力；最后将细胞移植入NOD／SCID小鼠中进行成瘤实验，以鉴定细胞的成瘤能力。这种方法系统全面且可信度高，但关键在于科学地确定出肿瘤干细胞的特异性表面标记物。自2003年以来，许多研究已发现在一些实体瘤中存在肿瘤干细胞特异的标记物，如乳腺癌、脑癌、前列腺癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、卵巢癌和黑色素瘤等。

我国每年新发肝癌患者数高达46.6万例，每年因肝癌死亡的人数高达42.2万例，我国是一个肝癌大国，全世界近一半的肝癌患者都来自中国。因此，提早检测出肝癌变得愈发重要。越来越多的证据表明肝癌组织中存在一小部分具有肿瘤干细胞特性的癌细胞，即肝癌干细胞 (liver cancer stem cells， LCSCs)。近年来 LCSCs 特异性标记物的鉴定和针对靶向治疗的靶点是研究的热点。目前已经鉴定了几种 LCSCs 标记物，包括 CD133、CD44、 CD90、 EpCAM、 OV6、 CD13、 CD24、 CD47 和角蛋白19 等。CSCs靶向的免疫疗法也是消除LCSCs的治疗方法之一。由于CSCs表达单个或多个特定的细胞表面标记，因此可以通过特异性的检测相应的标记物来检测肝癌干细胞。但是这些标记物检测费时费力并不能快速的实现肝癌干细胞的检测。

随着技术的发展，特异性结合细胞的单克隆抗体技术变得越发成熟，因此，开发一种特异性结合肝癌干细胞的单克隆干细胞是本领域普遍的追求。

发明内容

本发明克服了现有技术的缺陷，提供一种能够特异性的结合肝癌干细胞的单克隆抗体。

具体的，本发明提供的单克隆抗体，轻链可变区序列如SEQ ID NO：1所示，重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示。

更进一步的，本发明提供一种单克隆抗体片段，所述抗体片段为Fab。