[发明专利]一种基于非孵化处理的尼古丁转化烟株色质快速筛查方法

权利要求书

1.一种基于非孵化处理的尼古丁转化烟株快速筛查方法，其特征在于，包括育苗采样、生物碱提取、仪器分析及数据分析，具体包括以下步骤：

S1、育苗采样：将待筛选品种的烟草种子在育苗盘中播种培育45-55天后，对各株烟草幼苗叶片进行取样，在叶片上收集大小均匀、数量一致的叶块；

S2、生物碱提取：将步骤S1中取得的叶块用提取剂进行生物碱提取，得到生物碱提取液样品；

S3、仪器分析：采用气质联用仪对样品中的尼古丁和降烟碱含量进行分析；

S4、数据分析：使用气质联用仪化学工作站对所有样品和标准品进行自动峰识别和积分，计算PNC，PNC为降烟碱浓度除以尼古丁和降烟碱总浓度的商；当烟草为云烟85时，PNC值大于或等于判断点4%的烟苗即鉴定为转化株，当烟草为白肋烟TN90时，PNC值大于或等于判断点4.5%的烟苗即鉴定为转化株，将转化株去除；当烟株的PNC小于其对应的判断点时，即判断该烟株为非转化株，将其保留。

2.一种基于非孵化处理的尼古丁转化烟株快速筛查方法，其特征在于，包括育苗采样、生物碱提取、仪器分析及数据分析，具体包括以下步骤：

S1、育苗采样：将待筛选品种的烟草种子在育苗盘中播种培育45-55天后，对各株烟草幼苗叶片进行取样，在叶片上收集大小均匀、数量一致的叶块；

S2、生物碱提取：将步骤S1中取得的叶块用提取剂进行生物碱提取，得到生物碱提取液样品；

S3、仪器分析：采用气质联用仪对样品中的尼古丁和降烟碱含量进行分析；

S4、数据分析：使用气质联用仪化学工作站对所有样品和标准品进行自动峰识别和积分，计算PPNC值，PPNC为降烟碱峰面积除以尼古丁和降烟碱总峰面积的商；当烟草为云烟85时，PPNC值大于或等于判断点0.9%的烟苗即鉴定为转化株，当烟草为白肋烟TN90时，PPNC值大于或等于判断点0.8%的烟苗即鉴定为转化株，将转化株去除；当烟株的PPNC小于对应的判断点时，即鉴定该烟株为非转化株，将非转化株保留。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述取样是将该叶片沿主脉对折，然后再对折，用直径为5-7mm打孔器在折后烟叶上进行2-4次打孔，尽量使各孔在折后烟叶上分布均匀，收集8-16个圆形叶块。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述叶片是选择烟株的最大叶片，最大叶片的长宽乘积大于35cm²。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤S2中所述提取剂为MTBE，将每个幼苗样品置于1.5mL离心管中，加入含1μg/mL喹啉的0.3mL MTBE和0.5mL 2.5%的氢氧化钠水溶液，旋涡1分钟，待萃取液静止分层后取150μL上清液转移至气相色谱自动进样器进样小瓶进行仪器分析。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤S3中所述气质联用仪的气相色谱分析条件为：采用DB-5 MS毛细管色谱柱，分流比为20:1，进样量为2μL，分离温度为270℃，恒温，分离时间为1.8min，每个样品仪器总运行时间为3.4-3.6min，载气流量为0.5-1.5mL/min。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述载气为氦气。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤S3中所述气质联用仪的质谱分析条件为：选择离子模式进行数据采集，所述尼古丁和降烟碱的分析离子分别设置为84、70；采用电子轰击模式电离，电离电压70eV，检测器电压为1.0kV，离子源和传输线温度分别保持在200℃和300℃。

9.一种权利要求1或2所述方法在判别移栽后大田烟株或采烤前成熟烟株转化株中的应用。