[发明专利]CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用

说明书

本发明涉及CCR1在作为COPD诊断标志物中的应用。方法：用FCM检测30名健康对照组、30例肺炎患者及30例COPD患者外周血及痰(健康对照组除外)中性粒细胞氧化吞噬功能及相关受体的表达水平，分析组间差异。结果：与健康对照组相比，COPD患者组外周血和痰液中中性粒细胞氧化吞噬功能和表面CCR1受体的表达均有显著下降(P0.05)；与肺炎对照组相比，中性粒细胞氧化吞噬功能在外周血差异无统计学意义，但在痰液中，COPD患者组明显低于肺炎对照组，且COPD患者组痰液中中性粒细胞表面受体CCR1的表达明显高于肺炎对照组，差异均具有统计学意义(P0.05)。

技术领域

本发明涉及技术领域，具体地说，是CCR1表达在作为COPD诊断标志物中的应用。

背景技术

COPD是以不完全可逆的气流受限为特征的疾病，是一种常见、多发、高致死率的慢性呼吸系统疾病，是目前世界范围内四大致死性疾病之一。迄今为止，COPD的确切发病 机制尚不清楚，目前普遍认为COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征，肺部的 蛋白酶和抗蛋白酶失衡、氧化与抗氧化失衡也在COPD发病中起重要作用。

中性粒细胞(PMN)是机体参与固有免疫重要的效应细胞，PMN通过趋化吞噬、呼吸爆发、分泌分解酶和免疫活性物质而在调节炎症和免疫应答的过程中发挥重要作用。中性粒细胞的氧化聚集是COPD发生的重要环节之一，中性粒细胞及其组分均参与COPD发生 发展过程：1、趋化因子受体(Chemokine receptor,CR)是以趋化因子为配体的跨膜受体家族，中性粒细胞表面的CR(如CCR1)是其向病原体感染部位迁移或向炎症部位游走的关键分子。Wang等证实：炎症细胞上CCR1表达与COPD的严重程度相关；2、Toll样受体 (Toll-like receptor,TLRs)是一类天然的免疫受体，在各种炎症反应细胞吞噬作用的调节和细胞信号传导及细胞凋亡中起重要作用。TLR作为病原识别受体对中性粒细胞的功能起着决定性的作用，在炎症的发生，发展及转归中发挥重要的调控作用。

中性粒细胞是一把双刃剑，其胞质内的细胞毒性物质在杀伤外来人侵的病原微生物的 同时可能造成自身组织细胞的损伤。中性粒细胞在COPD发病的过程中担任了非常重要的 角色。研究多聚焦于在COPD患者中性粒细胞数量的增多是否因为凋亡的减少而引起寿命 的增长，然而目前细胞凋亡研究还没有表现出中性粒细胞寿命增长的明确证据，甚至一些 研究结论还是相互矛盾的。近年来，学者逐渐将视野转移到中性粒细胞自身功能方面，Prieto 等认为COPD患者存在PMN吞噬活性的缺陷，在动物实验中已经证明在假单胞菌感染的鼠 模型中，香烟烟雾提取物会损害中性粒细胞的吞噬作用。Sapey等在研究中提出，COPD患 者中性粒细胞可能具有自身功能缺陷，其趋化行为和移行结构与其他人群有本质差异。

因此，在研究中我们聚焦于中性粒细胞的氧化吞噬功能。COPD属于气道炎症，而肺炎为非气道炎症，我们选择肺炎作为对照组，能更好的说明实验的结论是气道炎症所特有的；同时检测COPD外周血与痰里中性粒细胞的吞噬功能能够更好地反应COPD整体与局 部的关系。

中性粒细胞吞噬功能的检测我们采用了流式细胞仪-DHR的方法，是一种常用于临床评 价中性粒细胞吞噬和氧化功能的简便、快速和重复性好的方法。无荧光染料二氢若丹明 123(dihydrorhodamine123DHR)，在中性粒细胞吞噬作用发挥时，通过呼吸爆发使其在氧化 反应中还原为具有高度绿色荧光的若丹明123(Rhodamine 123，Rho123)。通过流式细胞仪检测，可直观地检测中性粒细胞被刺激后其功能增强的表现，DHR首先被激活的中性粒细胞吞噬，然后被氧化中性粒细胞产生的氧化系统所氧化。因此这种方法所检测的中性粒细胞功能可以反映中性粒细胞的吞噬和氧化两种功能，任何一种功能缺陷都将影响检测结果。

关于本发明CCR1表达在作为COPD诊断标志物中的应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种外周血和痰中性粒细胞及CCR1 的用途。