[发明专利]可受微小RNA调控的分离的重组溶瘤痘病毒及其应用

说明书

本发明提供了可受微小RNA调控的分离的重组溶瘤痘病毒及其应用。所述分离的重组溶瘤痘病毒能够受微小RNA调控，所述微小RNA的表达量在哺乳动物的肿瘤细胞中比在同种哺乳动物的正常细胞中低，其中该重组溶瘤痘病毒基因组中的E10R基因的3’UTR区域中整合有所述微小RNA的靶序列。本发明的重组溶瘤痘病毒在多种肿瘤细胞中的复制均明显高于正常细胞，从而具有更好的肿瘤特异性、安全性，并且能够显著抑制肿瘤细胞的生长。此外，本发明为癌症治疗提供了更加丰富和有效的产品线，能够提供效果更好、肿瘤特异性更高、更加安全的产品。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及可受微小RNA调控的分离的重组溶瘤痘病毒、药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的用途。

背景技术

早在19世纪末人们就发现多种病毒可缓解肿瘤发展的进程，提示了病毒在肿瘤治疗领域的潜力，痘病毒是双链DNA病毒，基于该病毒良好的安全性、稳定性、免疫应答强、强溶瘤作用及在肿瘤内有效扩散等，使其在肿瘤免疫治疗领域获得越来越大的关注。虽然痘病毒具有天然的肿瘤靶向性，但未经基因改造的野生型病毒仍可感染许多正常细胞，可造成一定的风险。目前已报道了几种溶瘤痘病毒的菌株，包括Western Reserve、Wyeth、Copenhagen、Lister等已经构建了各自的突变体。在这些突变体中，痘病毒的胸腺激酶(TK)基因是最多被使用的突变区域之一，TK基因是参与病毒复制程序的主要基因之一，利用TK基因在肿瘤组织高表达的特性使得TK缺失痘病毒的复制能力在正常组织中受限。其次，痘病毒在宿主细胞内扩散与细胞表皮生长因子受体(EGFR)信号通路的活化密切相关，痘病毒感染细胞后分泌的VGF与已感染或邻近未感染细胞表面的EGFR结合并激活EGFR/Ras信号通路，为痘病毒感染邻近细胞提供有利的环境。因此VGF缺失的痘病毒在正常细胞内无法启动EGFR/Ras通道使其感染正常细胞受限，而肿瘤细胞中EGFR信号通路处于活化状态，故缺失VGF基因的痘病毒在肿瘤细胞内的感染不受影响，亦即相对提高了对肿瘤的特异性。但是，在临床实践中，VGF和/或TK缺失型的溶瘤痘病毒在采用全身给药方式施与患者时仍存在安全性风险。

虽然2005年中国国家药品监督管理局批准了上海三维生物技术有限公司的基因改构溶瘤腺病毒H101上市，用于治疗头颈部肿瘤；2015年美国FDA以及欧盟EMA批准了Amgen公司的基因改构溶瘤单纯疱疹病毒T-Vec上市，用于治疗晚期恶性黑素瘤。但目前市场上尚无溶瘤痘病毒的产品。

因此，在肿瘤和/或癌症的溶瘤病毒免疫治疗中，仍然需要开发出药效好、且肿瘤特异性更高、更加安全的产品。

发明内容

为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了分离的重组溶瘤痘病毒、药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的应用。

具体而言，本发明提供了：

(1)一种分离的重组溶瘤痘病毒，该重组溶瘤痘病毒能够受微小RNA调控，所述微小RNA的表达量在哺乳动物的肿瘤细胞中比在同种哺乳动物的正常细胞中低，其中该重组溶瘤痘病毒基因组中的E10R基因的3’UTR区域中整合有所述微小RNA的靶序列。

(2)根据(1)所述的重组溶瘤痘病毒，其中所述微小RNA选自：miR-9、miR-15a、miR-16、miR-26a、miR-27b、miR-29b、miR-30a、miR-32、miR-33、miR-34、miR-95、miR-101、miR-122、miR-124、miR-125a、miR-125b、miR-126、miR-127、miR-128、miR-133b、miR-139、miR-140、miR-142、miR-143、miR-145、miR-181、miR-192、miR-195、miR-198、miR-199a、miR-199b、miR-200、miR-203、miR-204、miR-205、miR-218、miR-219、miR-220、miR-224、miR-345、miR-375；优选miR-199a和miR-199b。